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产品概述
product description
贝博® BBcellProbe® 正常细胞/凋亡细胞/坏死细胞检测试剂盒是采用DNA探针双染细胞核的方法检测细胞的状态。染色液A可以透过正常细胞膜，而细胞凋亡后，细胞膜对染色液A的通透性增加，染色液B不能透过细胞膜，对正常细胞和凋亡细胞不能染色，而对坏死细胞可以染色。用两种染色液对细胞进行双染后，使用流式细胞仪或荧光显微镜即可对细胞状态进行检测。在双变量流式细胞仪的散点图上，这三群细胞表现分别为：正常细胞为低蓝色/低红色（A+/B+），凋亡细胞为高蓝色/低红色（A++/B+），坏死细胞为低蓝色/高红色（A+/B++）。 贝博® BBcellProbe® 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以为您提供各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。
保存温度
-20℃避光
注意事项
1.长期不用可以-20℃保存。
2.染色液避免反复冻融。多次冻融会导致失效。
3.染色液需要长期保存时可以根据使用情况进行小量分装后-20℃保存。
4.试剂拆封后请尽快使用完！
2.染色液避免反复冻融。多次冻融会导致失效。
3.染色液需要长期保存时可以根据使用情况进行小量分装后-20℃保存。
4.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
1年
检测方法
1.流式细胞仪
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜
适用样本
1.悬浮细胞
2.贴壁细胞
2.贴壁细胞
产品应用
1.流式细胞仪
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜
试剂准备
1.PBS 缓冲液（pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X））
2.或者HBSS（Hank's Balanced Salt Solution）
2.或者HBSS（Hank's Balanced Salt Solution）
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体损失导致试剂量不够用。
2.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。离心力在不损失细胞的前提下尽可能小，重悬细胞是动作要轻柔，避免多次反复的激烈吹打。不用涡旋振荡器。
3.染色液是光敏物质，在操作时请注意避光，尽量减少它们暴露在光下的时间。有必要时可以使用带盖子的冰盒或铝箔纸避光。
2.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。离心力在不损失细胞的前提下尽可能小，重悬细胞是动作要轻柔，避免多次反复的激烈吹打。不用涡旋振荡器。
3.染色液是光敏物质，在操作时请注意避光，尽量减少它们暴露在光下的时间。有必要时可以使用带盖子的冰盒或铝箔纸避光。
使用方法
1. 染色缓冲液的配制：
根据样品数按下列比例配制染色缓冲液。 取100μL试剂C加900μL无菌去离子水稀释，混匀即成染色缓冲液。
2. 收集样本细胞，细胞数量在1X106个左右。
3. 用PBS洗涤细胞两次。
4. 用500μL-1ml 染色缓冲液将细胞重悬。
5. 加入5-10ul染色液A。
6. 加入5-10ul染色液B。
7. 轻轻混匀后4℃避光孵育10-30分钟。
8. 用PBS洗涤细胞一次。
9. 用PBS重悬细胞。
10. 用流式细胞仪或荧光显微镜检测结果。染料A-DNA复合物的最大激发波长为350nm，最大发射波长为460nm，染料B-DNA复合物的最大激发和最大发射波长分别为488nm和615nm。
结果分析 ：
正常细胞为低蓝色/低红色（A+/B+），凋亡细胞为高蓝色/低红色（A++/B+），坏死细胞为低蓝色/高红色（A+/B++）。
形态学：正常细胞核形态呈圆形，淡蓝色，内有较深的蓝色颗粒；凋亡细胞的核呈亮蓝色，或核呈分叶状，碎片状。坏死细胞核红色。
根据样品数按下列比例配制染色缓冲液。 取100μL试剂C加900μL无菌去离子水稀释，混匀即成染色缓冲液。
2. 收集样本细胞，细胞数量在1X106个左右。
3. 用PBS洗涤细胞两次。
4. 用500μL-1ml 染色缓冲液将细胞重悬。
5. 加入5-10ul染色液A。
6. 加入5-10ul染色液B。
7. 轻轻混匀后4℃避光孵育10-30分钟。
8. 用PBS洗涤细胞一次。
9. 用PBS重悬细胞。
10. 用流式细胞仪或荧光显微镜检测结果。染料A-DNA复合物的最大激发波长为350nm，最大发射波长为460nm，染料B-DNA复合物的最大激发和最大发射波长分别为488nm和615nm。
结果分析 ：
正常细胞为低蓝色/低红色（A+/B+），凋亡细胞为高蓝色/低红色（A++/B+），坏死细胞为低蓝色/高红色（A+/B++）。
形态学：正常细胞核形态呈圆形，淡蓝色，内有较深的蓝色颗粒；凋亡细胞的核呈亮蓝色，或核呈分叶状，碎片状。坏死细胞核红色。
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