细胞周期检测试剂盒(7-AAD)

BB-41044
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  • 50T
  • 100T
价格
  • ¥650元
  • ¥950元
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产品概述 product description

贝博® BBcellProbe® 细胞周期检测试剂盒是利用细胞内DNA能够和荧光染料结合的特性,细胞各个时期其DNA含量不同从而结合的荧光染料不同,流式细胞仪检测的荧光强度也不一样来检测细胞周期。 细胞周期(cell cycle)是指细胞从前一次分裂结束起到下一次分裂结束为止的活动过程,通常由G0/G1期、S期、G2期和M期组成。G1期:细胞开始RNA和蛋白质的合成,但DNA含量仍保持二倍体。S期:DNA开始合成,这时细胞核内DNA的含量介于G1期和G2期之间。当DNA复制结束成为4倍体时,细胞进入G2期。G2期的细胞继续合成RNA及蛋白质,直到进入M期。因此,单纯从DNA含量无法区分G2期和M期。一旦有丝分裂发生,细胞分裂成两个细胞,这两个细胞或者进入下一个细胞周期,或者进入静止期(G0期),而G0期从DNA含量上同样无法与G1期区分。因此,整个复制周期可以描述为G0/G1、S、G2/M期。通过核酸染料PI标记DNA,并由流式细胞仪进行分析,可以得到细胞各个时期的分布状态,计算出G0/G1%、S%、G2/M%,了解增殖能力,在肿瘤病理学研究中,通常以S期细胞比率作为判断肿瘤增殖状态的指标。 7AAD为插入性核酸荧光染料,能选择性的嵌入核酸DNA双链螺旋的碱基之间与之结合,其结合的量与DNA的含量成正比例关系,用流式细胞仪进行分析,就可以得到细胞周期各个阶段的DNA分布状态,从而计算出各个期的百分含量。7-AAD染色后,假设G0/G1期细胞的荧光强度为1,那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2,正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。 一般细胞周期检测试剂盒采用PI染色,但是由于PI的发射波长是<625nm,通常在FL2中检测,对FITC、PE的干扰大。PI由于波谱较宽,同时在FL2\FL3中也能测,所以用了PI最多再加一个FITC,FL3就没法用了。PI还有一个重要的缺点是不容易清洗干净,使用后清洗流式细胞仪更加费时费物。 贝博® BBcellProbe® 7-AAD细胞周期试剂盒有效的解决了这些弊端,7-AAD的发射波长是650nm,只占用FL3通道进行检测,FITC、PE两个通道受影响都小,可以做三色分析。

保存温度
-20℃避光
注意事项
1.染料短期2周内可以2-8℃保存。染料长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。
2.染色液A为DMSO溶液,冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
4.试剂拆封后请尽快使用完!

有效期
6个月
检测方法
流式细胞仪
适用样本
1.悬浮细胞 2.贴壁细胞
产品应用
流式细胞仪
仪器准备
1.流式细胞仪
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
1.PBS 缓冲液(pH7.4,实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液(1X))
2.或者HBSS(Hank's Balanced Salt Solution)
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
2.最好使用含EDTA的细胞消化液。
3.洗涤细胞离心转速不可超过800×g。
4.乙醇固定时离心大概采用2000×g力5分钟,离心力太小可能部分细胞难以沉淀。 5.固定时在振荡器上轻轻振荡细胞,并缓慢滴加75%乙醇,直接加入会导致细胞团聚的现象,很难重悬成单细胞。或者先用冷PBS悬浮细胞,充分悬浮,使细胞充分分散成单细胞。之后缓慢加入无水乙醇,终浓度为70-90%乙醇。乙醇固定之后须无细胞沉淀。


使用方法

1. 收集样本细胞,细胞数量在5-10X106个。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次。
3. 在15ml离心管中,用500ul PBS重悬细胞。
4. 滴加2-5ml冷乙醇4℃固定过夜或-20℃固定1小时。
5. 取5X106细胞,在15ml锥形离心管中1000×g离心10分钟,弃上清,收集细胞。
6. 用冷PBS洗涤细胞两次。
7. 用500ul冷PBS重悬细胞。
8. 加入Rnase A溶液20ul, 37℃水浴30分钟。
9. 用400目细胞筛网过滤。
10. 在1000×g离心10分钟,弃上清,收集细胞。
11. 用500ul PBS重悬细胞。
12. 加入5ul 7-AAD染液,充分混匀, 4℃避光孵育30分钟-1小时。
13. 流式检测结果。激发波长为488nm。发射波长647nm。采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。

常见问题分析
1.染色后找不到细胞?
固定细胞可能难以离心沉淀;固定细胞可能成团;固定细胞膜容易损伤成碎片。操作过程中注意以上几点。

2.可以不固定细胞吗?
本试剂盒可以用于非固定细胞的周期检测。
参考文献
1.Feng Liu, Wen Zhang, Fusheng Yang
Interleukin-6-stimulated progranulin expression contributes to the malignancy of hepatocellular carcinoma cells by activating mTOR signaling
Sci Rep. 2016; 6: 21260 IF 5.228

2.Donglai Lv.
A three-dimensional collagen scaffold cell culture system for screening anti-glioma therapeutics.
Oncotarget, 2016, 7. IF 5.008

3.Zhen Xing, Sai Gao, Yan Duan
Delivery of DNAzyme targeting aurora kinase A to inhibit the proliferation and migration of human prostate cancer.
Int J Nanomedicine, 2015; 10: 5715–5727. IF 4.32