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产品概述
product description
贝博® BBproExtra® 细菌总蛋白提取试剂盒可以从各种菌体中提取总蛋白，包括革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌，可用于纯化蛋白的粗品制备及总蛋白制备。提取过程简单方便。该试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物和磷酸酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高质量的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为不具有天然活性的蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。 本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
WB,IP等
适用样本
细菌
产品特点
1.使用方便：不需昂贵设备。
2.可以处理各种细菌菌体，包括新鲜菌液和冰冻菌体。
3.将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。
4.采用温和的中性裂解组分，保持蛋白活性。
5.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
6.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
7.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
8.本试剂盒中不有EDTA，与金属螯和层析等兼容。
产品应用
WB,IP等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3..涡旋混匀器
4.移液器
5..冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.预实验很重要。必须要做预实验，在正式实验之前取少量样本优化实验条件，并像正式样本一样认真进行，看实验结果是否可行，实验条件是否适合自己的样本。由于生物样本的多样性，不同样本的实验条件通常差异较大，同种细胞的不同模型下需要的实验条件也可能不同，为了避免浪费正式样本和试剂，一定要提前预实验优化实验条件。
2.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
3.实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
4.蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
5.可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
6.本试剂盒中提取液和蛋白酶抑制剂中均不含EDTA，根据需要可自行加入。
使用方法
1. 提取液的准备：
根据所需要提取的样本量，每500 μl裂解液中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物和2 μl磷酸酶抑制剂混合物和5 μl蛋白稳定液，充分混匀后置冰上备用。
2. 在4℃， 10000×g条件下将菌液离心5 min，弃上清，尽量吸干剩余液体，收集菌体。
3. 用PBS洗菌体一次。若为冷冻菌体直接进行下面操作步骤即可。
4. 按每50-100 mg湿重菌体样本加入250-500 μl提取液，吹打混匀，2-8℃振荡45-60分钟。
5. 在4℃， 12000×g条件下将菌液离心5分钟，将上清移入冷的干净离心管。
6. 即得到细菌总蛋白样品。
7. 将总蛋白样品定量后分装置于-80℃冰箱或直接用于下游实验。
常见问题分析
1.蛋白浓度低？
处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。有些革兰氏阳性菌可能较难裂解，有条件的话最好进行超声处理。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
3.提取时出现胶状沉淀？
蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA结合特别紧密的特定蛋白的情况下，可以直接离心取上清进行后续实验即可；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理，300w/10秒间隔10秒，超声3分钟，随后离心取上清用于后续实验。
4.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒含有破坏蛋白天然结构的组份，有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白无法保持其天然构象和活性。需要活性蛋白的可以选择贝博其它货号的试剂盒产品。
参考文献
1.HaiFeng Su et al.
An integrated approach combines hydrothermal chemical and biological treatment to enhance recycle of rare metals from coal fly ash
Chemical Engineering Journal 2020 （IF=8.355）
2.HF Su et al.
A sequential integration approach using Aspergillus Niger to intensify coal fly ash as a rare metal pool
Fuel 2020 （IF=5.128）
3.H Shi et al.
Highly efficient visible light driven photocatalytic inactivation of E. coli with Ag QDs decorated Z-scheme Bi2S3/SnIn4S8 composite
Applied Catalysis B: Environmental 2019 （IF=11.698）
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