2-8℃

1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！

一年

WB,IP等

动物细胞

1.使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2.提取过程简单方便。
3.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5.蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白和膜蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

WB,IP等

1.离心机
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒

1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒

1.离心管
2.吸头
3.一次性手套

使用注意事项：
 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
 蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
 下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。

细胞核蛋白提取
1. 提取液制备：
每200ul冷的蛋白提取液A加入1ul蛋白酶抑制剂混合物和1ul磷酸酶抑制剂。 每200ul冷的蛋白提取液B中加入1ul蛋白酶抑制剂混合物和1ul磷酸酶抑制剂，混匀后置冰上备用。
2. 取5-10×106个细胞，在4℃，500×g力条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每20ul细胞压积（细胞沉淀体积）中加入100-200μl冷的提取液 A，充分吹打混匀，置2-8℃条件振荡15-30分钟。
5. 再次混匀，然后在4℃，10000×g条件下离心5分钟。
6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白，请置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
7. 沉淀用PBS洗涤一次，在4℃，5000×g条件下离心5分钟，弃上清，留沉淀。
8. 在沉淀中加入80-200μl冷的提取液B，高速涡旋振荡15秒。
9. 置2-8℃条件振荡30-40分钟。
10. 在4℃，12000×g条件下离心10分钟。
11. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。
12. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

1.核蛋白浓度低？
核蛋白丰度较低，需要足够细胞数量提取，在条件允许的情况下，尽可能加大细胞量。
注意用蛋白提取液B处理时没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂B的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀，至无明显沉淀。
如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则需要采用超声处理。

2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。

3.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。

1.Pingli Li et al.
Preparation and in vitro immunomodulatory effect of curdlan sulfate
Carbohydrate Polymers 2014 （IF=7.182）

2.Guang Yu et al.
Ser9 phosphorylation causes cytoplasmic detention of I2PP2A/SET in Alzheimer disease
Neurobiology of Aging 2013 （IF=6.189）

3.Wan Li et al.
Anti-inflammatory effects of Morchella esculenta polysaccharide and its derivatives in fine particulate matter-treated NR8383 cells
International Journal of Biological Macromolecules 2019 （IF=5.162）

4.Mengjuan Wu et al.
Phosphorylation of SET mediates apoptosis via P53 hyperactivation and NM23-H1 nuclear import
Neurobiology of Aging 2018 （IF=5.117）

5.Xiaoling Ma et al.
Staphylococcal Panton-Valentine Leukocidin Induces Pro-Inflammatory Cytokine Production and Nuclear Factor-Kappa B Activation in Neutrophils
PloS one 2012 （IF=4.411）

6.Jinchun Qian et al.
Ophiopogonin D prevents H2O2-induced injury in primary human umbilical vein endothelial cells
Journal of Ethnopharmacology 2010 （IF=3.69）