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保存温度
2-8℃避光
注意事项
开盖后组份按要求条件保存。
有效期
6个月
检测方法
荧光酶标仪或荧光光度计
适用样本
纯化的重组酶/细胞裂解/组织匀浆液
仪器准备
1.荧光酶标仪或荧光光度计
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
.冰盒
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液等
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.荧光检测专用黑色96孔板（必备）
2.吸头
3.一次性手套
4.荧光检测专用黑色96孔板（必备）
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
2.预实验很重要。必须要做预实验，在正式实验之前取少量样本优化实验条件，并像正式样本一样认真进行，看实验结果是否可行，实验条件是否适合自己的样本。由于生物样本的多样性，不同样本的实验条件通常差异较大，同种细胞的不同模型下需要的实验条件也可能不同，为了避免浪费正式样本和试剂，一定要提前预实验优化实验条件。
2.预实验很重要。必须要做预实验，在正式实验之前取少量样本优化实验条件，并像正式样本一样认真进行，看实验结果是否可行，实验条件是否适合自己的样本。由于生物样本的多样性，不同样本的实验条件通常差异较大，同种细胞的不同模型下需要的实验条件也可能不同，为了避免浪费正式样本和试剂，一定要提前预实验优化实验条件。
使用方法
以下为简化步骤，仅供参考：
样品处理
A.细胞样品
1.收集细胞，在4°C，500×g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
2.用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3.在细胞中加入50μ冷的裂解缓冲液，高速涡旋振荡15秒。
4.置冰上持续振荡20-45分钟。
5.在4°C，12000×g条件下离心15分钟。
6.快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上保存备用。
B．组织样品
1.取适量组织样本剪碎，按照每50mg/100μl冷的裂解缓冲液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体，冰上振荡20-45分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
2.在4°C，12000×g条件下离心5分钟。
3.快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
蛋白定量
对上述处理过的上清进行蛋白定量。
Cathepsin B活性检测
1.取50μl裂解上清（含100-200μg蛋白)，加入50μl检测缓冲液。
2.再加入1μlCathepsinB荧光底物，充分混匀，在37°C下避光反应30分钟-2小时。
3.荧光酶标仪检测荧光强度。激发波长（Ex）=328nm，发射波长（Em）=393 nm。
4.根据待测细胞的荧光值与对照细胞样本的荧光值的比值计算相对的CathepsinB活性程度变化。
样品处理
A.细胞样品
1.收集细胞，在4°C，500×g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
2.用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3.在细胞中加入50μ冷的裂解缓冲液，高速涡旋振荡15秒。
4.置冰上持续振荡20-45分钟。
5.在4°C，12000×g条件下离心15分钟。
6.快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上保存备用。
B．组织样品
1.取适量组织样本剪碎，按照每50mg/100μl冷的裂解缓冲液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体，冰上振荡20-45分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
2.在4°C，12000×g条件下离心5分钟。
3.快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
蛋白定量
对上述处理过的上清进行蛋白定量。
Cathepsin B活性检测
1.取50μl裂解上清（含100-200μg蛋白)，加入50μl检测缓冲液。
2.再加入1μlCathepsinB荧光底物，充分混匀，在37°C下避光反应30分钟-2小时。
3.荧光酶标仪检测荧光强度。激发波长（Ex）=328nm，发射波长（Em）=393 nm。
4.根据待测细胞的荧光值与对照细胞样本的荧光值的比值计算相对的CathepsinB活性程度变化。
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