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产品概述
product description
贝博®BBcellProbe细胞吞噬检测试剂盒是采用贝博合成的荧光染料标记的乳胶微球检测细胞的吞噬情况的试剂盒。荧光探针BBcellProbeP25标记的微球被吞噬细胞摄取后，通过荧光信号（显微镜观察或流式定量）判断吞噬活性情况。
本试剂盒的P25荧光为橙红色标记的荧光，最大激发波长为540nm，最大发射波长为580nm。除了本橙红色荧光检测的试剂盒，贝博还可以提供绿色、深红色、蓝色等探针的检测试剂盒（相关产品：BB-48861/488612/6)，用于检测带其他颜色标签的细胞吞噬情况。
保存温度
2-8℃
注意事项
1. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
2.试剂瓶开盖后各组份按要求条件保存。
3.拆封后请尽快使用完！
2.试剂瓶开盖后各组份按要求条件保存。
3.拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
荧光酶标仪/荧光光度计/共聚焦显微镜/流式细胞仪
适用样本
动物细胞
产品应用
荧光酶标仪/荧光光度计/共聚焦显微镜/流式细胞仪
仪器准备
1.荧光酶标仪/荧光光度计/共聚焦显微镜/流式细胞仪
2.超声清洗仪
3.离心机
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
2.超声清洗仪
3.离心机
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液/HBSS
2.培养基
2.培养基
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性书套
4.激光共聚焦皿/24孔板（带爬片）
2.吸头
3.一次性书套
4.激光共聚焦皿/24孔板（带爬片）
使用注意事项
1.预实验很重要。必须要做预实验，在正式实验之前取少量样本优化实验条件，并像正式样本一样认真进行，看实验结果是否可行，实验条件是否适合自己的样本。由于生物样本的多样性，不同样本的实验条件通常差异较大，同种细胞的不同模型下需要的实验条件也可能不同，为了避免浪费正式样本和试剂，一定要提前预实验优化实验条件。
2.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液
体洒落。
2.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液
体洒落。
使用方法
染色工作液的配制
1.使用前将BBcellProbe P25荧光探针试剂A母液涡旋振荡30s，然后在超声波清洗仪中使用30%功率超声处理10min。
2.根据样本数量，用37°C培养箱预热的无血清培养基将BBcellProbeP25荧光探针100-200倍稀释。吸取超声后的母液，沿离心管壁缓慢加入无血清培养基中，轻轻颠倒混匀（禁止剧烈吹打，避免产生气泡）。稀释后在超声波清洗仪中使用20-30%功率超声处理5min。配制成染色工作液。
吞噬检测：
1．准备吞噬细胞：
获取待测的吞噬细胞（如从小鼠腹腔提取巨噬细胞，或从人外周血单核细胞诱导分化），接种于激光共聚焦皿/24孔板（带爬片），铺板密度1×10^5~5×10^5个／孔，无血清培养基同步化12~24h。
2.吸除细胞培养皿中的同步化培养基，加入稀释好的P25荧光工作液，每孔500μL。
3.共孵育：将细胞于染色工作液在37°C条件下共同孵育一段时间（通常为30分钟至4小时)。
4.孵育结束后，快速吸除染色工作液，用预温至37°C的检测缓冲液B洗细胞一次。
5.用预热的无菌PBS轻柔洗涤细胞3~5次。
6.检测与分析。
1.使用前将BBcellProbe P25荧光探针试剂A母液涡旋振荡30s，然后在超声波清洗仪中使用30%功率超声处理10min。
2.根据样本数量，用37°C培养箱预热的无血清培养基将BBcellProbeP25荧光探针100-200倍稀释。吸取超声后的母液，沿离心管壁缓慢加入无血清培养基中，轻轻颠倒混匀（禁止剧烈吹打，避免产生气泡）。稀释后在超声波清洗仪中使用20-30%功率超声处理5min。配制成染色工作液。
吞噬检测：
1．准备吞噬细胞：
获取待测的吞噬细胞（如从小鼠腹腔提取巨噬细胞，或从人外周血单核细胞诱导分化），接种于激光共聚焦皿/24孔板（带爬片），铺板密度1×10^5~5×10^5个／孔，无血清培养基同步化12~24h。
2.吸除细胞培养皿中的同步化培养基，加入稀释好的P25荧光工作液，每孔500μL。
3.共孵育：将细胞于染色工作液在37°C条件下共同孵育一段时间（通常为30分钟至4小时)。
4.孵育结束后，快速吸除染色工作液，用预温至37°C的检测缓冲液B洗细胞一次。
5.用预热的无菌PBS轻柔洗涤细胞3~5次。
6.检测与分析。
常见问题分析
1.对照如何设定？
建议设置以下对照：
4°C阴性对照：相同条件下4C孵育，排除微球非特异性吸附。
吞噬抑制剂对照：例如加入细胞松弛素D（5~10μmol/L)，抑制肌动蛋白聚合，验证吞噬为能量依赖的主动内吞。
空白细胞对照：不加探针的细胞，排除细胞自发荧光。
2.选择绿色荧光还是红色荧光探针？
绿色荧光相对更易淬灭且pH敏感；橙色和红色荧光探针更稳定。
建议设置以下对照：
4°C阴性对照：相同条件下4C孵育，排除微球非特异性吸附。
吞噬抑制剂对照：例如加入细胞松弛素D（5~10μmol/L)，抑制肌动蛋白聚合，验证吞噬为能量依赖的主动内吞。
空白细胞对照：不加探针的细胞，排除细胞自发荧光。
2.选择绿色荧光还是红色荧光探针？
绿色荧光相对更易淬灭且pH敏感；橙色和红色荧光探针更稳定。
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