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产品概述
product description
侧向扩散
贝博BBcellProbe细胞膜流动性检测试剂盒是利用贝博合成的花类疏水荧光探针M71测定膜流动性的试剂盒。其核心原理是利用花分子的激基缔合特性实现细胞膜流动性的检测。
BBcellProbe®M71探针单体特征发射峰为400nm（IM），激基缔合物特征发射峰为470nm(IE)，IE/IM比值激基缔合物/单体荧光强度比，I470/I400）与细胞膜流动性正相关，比值越高，流动性越高：比值越低，膜流动性越低。
保存温度
-20℃ 避光
注意事项
1.染料长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。
2.染色液A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
2.染色液A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
有效期
6个月
检测方法
荧光分光光度计/ 酶标仪等
适用样本
动物细胞
产品应用
荧光分光光度计/ 酶标仪等
仪器准备
1.荧光分光光度计/ 酶标仪
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.HBSS
2.HBSS
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.荧光检测专用的黑色细胞培养板
2.吸头
3.一次性手套
4.荧光检测专用的黑色细胞培养板
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
2.染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
3.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
4.染色后立即进行分析。
5.标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先确定最佳条件。
6.必须使用细胞荧光检测专用的黑色细胞培养板。
7.以下步骤仅供参考。最终以试剂盒的纸质说明书为主。请根据实际实验方案设计或者参考文献实验。
2.染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
3.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
4.染色后立即进行分析。
5.标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先确定最佳条件。
6.必须使用细胞荧光检测专用的黑色细胞培养板。
7.以下步骤仅供参考。最终以试剂盒的纸质说明书为主。请根据实际实验方案设计或者参考文献实验。
使用方法
简略步骤，仅供参考，最终以试剂盒里的纸质说明书为准：
1.染色工作液的配制：
用稀释液将探针1000倍稀释，配成染色工作液。
标记和检测：
1.取对数生长期的贴壁细胞，用常规培养基铺于黑色96孔荧光板，每孔加入100ul细胞悬液，细胞密度10的4次方-----5x10的4次方个/孔；
2. 在37℃ 5% 二氧化碳培养箱孵育24h，至细胞贴壁融合度达70%-80%；
3.弃去96孔板中的培养基，用预热至37℃的PBS轻轻洗涤细胞2-3次，每孔150ul，洗去血清、培养基杂质；
4.每孔加入100ul现配的染色工作液；
5.在37℃ 避光孵育20-30min；
6.小心弃去孔内染色工作液，用预温37℃的PBS再次洗涤细胞2-3次；
7.荧光检测。 每孔加入100ul预温的PBS。
将96孔板置于37℃控温的荧光酶标仪中，设置检测参数；
激发波长：343nm；
发射波长：400nm（IM）,470(IE)处的荧光强度值。
8.结果判定。
IE/IM比值越低，细胞膜流动性越低；
IE/IM比值越高，细胞膜流动性越高；
对照设置参考：
1.空白对照：未标记探针的细胞作为本底对照，用于扣除背景荧光；
根据实验目的设置阳性和阴性对照组。
阳性对照： 增加膜流动性；
阴性对照：降低膜流动性。
1.染色工作液的配制：
用稀释液将探针1000倍稀释，配成染色工作液。
标记和检测：
1.取对数生长期的贴壁细胞，用常规培养基铺于黑色96孔荧光板，每孔加入100ul细胞悬液，细胞密度10的4次方-----5x10的4次方个/孔；
2. 在37℃ 5% 二氧化碳培养箱孵育24h，至细胞贴壁融合度达70%-80%；
3.弃去96孔板中的培养基，用预热至37℃的PBS轻轻洗涤细胞2-3次，每孔150ul，洗去血清、培养基杂质；
4.每孔加入100ul现配的染色工作液；
5.在37℃ 避光孵育20-30min；
6.小心弃去孔内染色工作液，用预温37℃的PBS再次洗涤细胞2-3次；
7.荧光检测。 每孔加入100ul预温的PBS。
将96孔板置于37℃控温的荧光酶标仪中，设置检测参数；
激发波长：343nm；
发射波长：400nm（IM）,470(IE)处的荧光强度值。
8.结果判定。
IE/IM比值越低，细胞膜流动性越低；
IE/IM比值越高，细胞膜流动性越高；
对照设置参考：
1.空白对照：未标记探针的细胞作为本底对照，用于扣除背景荧光；
根据实验目的设置阳性和阴性对照组。
阳性对照： 增加膜流动性；
阴性对照：降低膜流动性。
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