2-8℃ 保存

开盖后组份按要求条件保存。 样本要求：
血清或血浆应尽快从样本管中分离，不应溶血。
血清或血浆中的葡萄糖在2-8℃可保存24小时。

3个月

酶标仪/分光光度计

血清、血浆、细胞细菌裂解液

酶标仪/分光光度计

1.酶标仪/分光光度计
2.离心机
3.移液器
4.水浴锅

1.蒸馏水

1.离心管
2.吸头
3.抗凝管

1.正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。
2.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
3.禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
4.样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
5.最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
6.实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

试剂配制：
使用前往粉剂试剂B中加入2.6ml试剂A，充分振荡溶解混匀。
使用前往粉剂试剂C中加入2.6ml试剂A，充分振荡溶解混匀。
试剂B置于37℃水浴中预热30min。

二、 样本处理
1、 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml) =1：5-10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1ml 提取液）进行冰浴匀浆，然后8000g ，4℃离心10分钟，取上清液待测。
2、 细胞、真菌、细菌等：按照细胞数量（104）个：试剂A体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议5*106细胞加入1ml提取液D），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒,间隔7秒,总时间3min），然后8000g，4℃离心10分钟，取上清液置于冰上待测。
3、 血清、血浆等液体样本：直接测定

三、 样本测定
以下以酶标仪测定为例，也可以用分光光度计等其他具有相应波长的检测仪器检测，按照比例调整试剂的用量即可。
1、 打开酶标仪，预热，调节检测波长至412nm，蒸馏水调零；

迅速充分混匀，于412nm 处测定3min 内吸光值变化。
第10s 吸光值记为A1，第190s 吸光值记为A2，△A =A2-A1
【注】：
 空白管只需测定一次。
 如果A2-A1大于2，需要将样本用蒸馏水稀释，计算公式中乘以相应的稀释倍数。

四、 AchE 活性计算公式
1、 组织AchE 活性
1.1按照样本质量计算
活性单位定义：每克组织每分钟催化产生1nmol TNB 的酶量为1 个酶活单位
AchE 酶活(nmol/min/g鲜重)
= [(△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V（反总）×109]÷（W ×V样÷V样总）÷T
= 245×(△A 测定管-△A 空白管)÷W

1.2按照蛋白质含量计算
活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol TNB 的酶量为1 个酶活单位。
AchE 酶活(nmol/min/mg prot)
= [(△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V（反总）×109]÷（Cpr ×V 样）÷T
= 245×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr

2、 细胞、细菌AchE 活性
活性单位定义：每104细胞每分钟催化产生1nmol TNB 的酶量为1 个酶活单位。
AchE 酶活(nmol/min/104cell)
= [(△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V（反总）×109]÷（细胞数量 ×V样÷V样总）÷T
= 245×(△A 测定管-△A 空白管)÷细胞数量

3、 血清/血浆AchE 活性
活性单位定义：每毫升血清每分钟催化产生1nmol TNB 的酶量为1 个酶活单位。
AchE 酶活(nmol/min/ml)
= [(△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V（反总）×109]÷V 样÷T
= 245×(△A 测定管-△A 空白管)

ε：TNB 摩尔消光系数，13.6×103 L/mol/cm；
V （反总）：反应体系总体积（L），1 mL=0.001 L；
106：1mol=1×106μmol；
V 样总：加入提取液D体积，1mL；
Cpr：蛋白浓度（mg/mL）；
W：样本质量，g；
V 样：加入上清液体积（mL），0.1 mL；
T：反应时间（min），3 min。