2-8℃ 避光

开盖后组份按要求条件保存。 样本要求：
血清或血浆应尽快从样本管中分离，不应溶血。
血清或血浆中的葡萄糖在2-8℃可保存24小时。

一年

酶标仪

血清、血浆、细胞裂解液、组织裂解液

酶标仪

1.酶标仪
2.离心机
3.移液器
4.水浴锅
5.匀浆器
6.冰箱

1.纯水
2.生理盐水

1.离心管
2.吸头
3.抗凝管

1.本试剂盒亦可用分光光度计进行检测，但检测的样本数相应减少。
2.待测样品中不能含有CAT抑制剂，同时需避免反复冻融。
3.CAT 检测缓冲液如果出现浑浊或絮状物，应弃用。
4.完整的红细胞以及未稀释的溶血液中的过氧化氢酶置于4℃一周仍然很稳定，稀释后的溶血液中CAT容易失活。
5.尽量避免冰冻样品造成溶血，否则过氧化氢酶活性会下降10%-15%。
6.血清样品室温下3天内活性下降64.7%，4℃下下降10.5%，-20℃保存30天活性仅下降3.5%。因此，待测样品均应-20℃或-70℃保存。

试剂配制：
65mM H2O2基液的配制：
1. 把浓度约为1M的H2O2基液用本试剂盒提供的CAT 检测缓冲液稀释100倍，使H2O2基液中的H2O2浓度约为10mM。
2. 用分光光度计测定A240（一般情况下，新配制的10m MH2O2基液A240在0.45左右，经过3个月后 A240在0.42左右），H2O2浓度(mM)=22.94×A240。
3. 计算出本试剂盒提供的H2O2基液中的H2O2的实际浓度。然后再根据实际的过氧化氢浓度，配制65mM H2O2基液。

样本的制备：
细胞或组织样品：
取恰当细胞或组织进行裂解，可以采用Western及IP细胞裂解液，用匀浆机/匀浆器进行充分匀浆，2000g离心10分钟取上清，用于CAT的检测。长期不用可以-70℃冻存。

样品准备完毕后用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的CAT含量。

血浆、血清和尿液样品：
血浆、血清按照常规方法制备，用生理盐水10倍稀释后，可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-70℃冻存，用于CAT的检测。

全血样品：
收集适量的全血(whole blood)至一抗凝管内，颠倒混匀。取100μl全血冻融一次，用CAT 检测缓冲液1000倍后进行CAT检测。

血液中的红细胞裂解液：
用抗凝管收集血液，颠倒混匀。取至少500μl全血4℃ 3000g离心5min，弃上清，沉淀用预冷的生理盐水洗涤3次。用约5倍细胞体积的预冷的纯水，重悬细胞沉淀，冰浴10min。使用前用CAT 检测缓冲液稀释400倍后进行CAT检测。

高活性样品：
如果样品中含有较高活性的CAT，可以使用CAT 检测缓冲液稀释。

CAT的检测：
按照下表设置空白孔、自身对照孔、样品孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测最好能设置平行孔。

CAT活性计算：
单位定义：在37℃ 1min催化水解1umol过氧化氢为一个CAT酶活力单位。

样品中的CAT活性：

血清、血浆、尿液中CAT活力（U/ml）=｛（A自身对照-A样品）/A空白｝ x 650 x N

组织、细胞中CAT活力（U/mg）=｛（A自身对照-A样品）/A空白｝ x 650/待测样品蛋白浓度（mg/ml）

备注：
A自身对照为自身对照的吸光度值；
A样品为待测样品的吸光度值；
A空白为空白的吸光度值；
N为待测样品检测前的稀释倍数。