2-8℃ 避光

开盖后组份按要求条件保存。 样本要求：
血清或血浆应尽快从样本管中分离，不应溶血。
血清或血浆中的葡萄糖在2-8℃可保存24小时。

3个月

分光光度计/酶标仪

血清、血浆、细胞裂解液、组织裂解液

分光光度计/酶标仪

1.分光光度计/酶标仪
2.离心机
3.移液器
4.水浴锅
5.冰盒
6.比色皿

1.蒸馏水

1.96孔板
2.离心管
3.吸头
4.一次性手套

1.试剂盒仅科研使用。不可用于临床检测。
2.可根据使用仪器不同，等比例改变试剂与样本的量。
3.抽血后，应迅速将血清或血浆与红细胞分离，可以避免糖酵解。如加入氟化钠，则在24小时内可以防止酵解作用。
4.为确保测试结果准确可靠，每批测定必须进行质量控制。
5.测定血糖用草酸钾-氟化钠抗凝：每5ml血液加0.2 ml 6%草酸钾-4%氟化钠；其优点是抑制糖酵解和分解，测得的葡萄糖浓度更接近真实；缺点是干扰其它生化检查项目。枸椽酸钠抗凝剂易引起溶血，也干拢许多生化检查项目。如必须用同一份标本做全套生化检测，可采用肝素钠抗凝剂。
6.血样应在在30分钟内完成测定。血清或血浆仍含大量血细胞，室温下糖酵解旺盛可消耗葡萄糖使测量值降低。室温放置1小时葡萄糖含量开始降低，3小时后明显下降。4 ºC保存血样葡萄糖稳定性明显增加。使用血浆测定葡萄糖浓度可能更接近真实浓度。相比之下用血清标本测得的葡萄糖浓度偏低，且随着样品放置时间延长而明显下降。
7.不能直接测定尿液葡萄糖含量。
8.还原性物质如尿酸、抗坏血酸、胆红质、谷胱甘肽可竞争消耗反应产生的过氧化氢，使测定结果偏低。
9.含强还原剂如二硫苏糖醇、巯基乙醇样品不建议使用本法。
10.当检验结果大于28mmol/L时，请用生理盐水稀释后再测定，结果乘以稀释倍数。

使用方法：
一、 试剂配制：
使用前往粉剂试剂C中加入20ml缓冲液试剂B，充分振荡溶解混匀。
使用前往粉剂试剂D中加入20ml缓冲液试剂B，充分振荡溶解混匀。
【注】：
 用不完的试剂4℃保存一个月有效。


二、 样本处理
1、 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml) =1：5-10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1ml 提取液A）进行冰浴匀浆，然后8000g ，4℃离心10分钟，取上清置于冰上液待测。
2、 细胞、真菌、细菌等：按照细胞数量（104）个：试剂A体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议5*106细胞加入1ml提取液D），冰浴超声波破碎细胞（功率20%或200w，超声3秒,间隔10秒,重复30次），然后8000g，4℃离心10分钟，取上清液置于冰上待测。
3、 血清、血浆等液体样本：直接测定

三、 样本测定
以下以酶标仪测定为例，也可以用分光光度计等其他具有相应波长的检测仪器检测，按照比例调整试剂的用量即可。
1、 打开酶标仪，预热，调节检测波长至500nm，蒸馏水调零；
2、 煮沸样本的准备：取500μL 样本至新的EP 管中，95℃水浴10min，冷却至室温后，8000g，4℃离心10min，取上清作为对照管的煮沸样本待测。
3、 按下表加样。加样表（以200ul体系为例）
迅速充分混匀，35℃ 保温15min 后，于500nm 波长处读取吸光度。
ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管需设一个对照管。

四、 GOD活性计算公式
1、 组织GOD活性
1.1按照样本质量计算
活性单位定义：每克组织每分钟催化产生1nmol H2O2的酶量为1 个酶活单位
GOD 酶活(nmol/min/g鲜重)
= (ΔA+0.0169) ÷2.8348×V 反总÷(W×V 样÷V 样总) ×1000÷T
= 58.8×(ΔA+0.0169)÷W

1.2按照蛋白质含量计算
活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol H2O2 的酶量为1 个酶活单位。
GOD 酶活(nmol/min/mg prot)
= (ΔA+0.0169) ÷2.8348×V 反总÷(V 样×Cpr) ×1000÷T
= 58.8×(ΔA+0.0169)÷Cpr

2、 细胞、细菌GOD 活性
活性单位定义：每104细胞每分钟催化产生1nmol H2O2 的酶量为1 个酶活单位。
GOD 酶活(nmol/min/104cell)
= (ΔA+0.0169) ÷2.8348×V 反总÷(500×V 样÷V 样总) ×1000÷T
= 0.118×(ΔA+0.0169)

3、 血清/血浆AchE 活性
活性单位定义：每毫升血清每分钟催化产生1nmol H2O2 的酶量为1 个酶活单位。
GOD 酶活(nmol/min/ml)
= (ΔA+0.0169) ÷2.8348×V 反总÷V 样÷T×1000
= 58.8×(ΔA+0.0169)

【注】：
V 反总：反应体系总体积，0.125ml/0.625mL；
V 样：加入样本体积，0.05ml/0.25mL；
V 样总：加入提取液体积，1 mL；
T：反应时间，15 min；
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
W：本质量，g；
500：细菌或细胞总数，500 万。

1.Chengke Wang , Jiangyu Li , Rong Tan, et al.
Colorimetric method for glucose detection with enhanced signal intensity using ZnFe2O4–carbon nanotube–glucose oxidase composite material
Analyst 2019 （IF=3.864）

2.Shanshan Gao, Fangmin Li, Huimin Li, et al.
Effects and Molecular Mechanism of GST-Irisin on Lipolysis and Autocrine Function in 3T3-L1 Adipocytes
PLoS One 2016 （IF=2.766）