叶绿体蛋白/胞质蛋白提取试剂盒

BB-31793
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  • 50T
  • 100T
价格
  • ¥600元
  • ¥1000元
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产品概述 product description

叶绿体是植物细胞所特有的能量转换细胞器,光合作用就是在叶绿体中进行的, 由于具有这一重要功能,所以叶绿体一直是细胞生物学、遗传学和分子生物学的重要研究对象。 贝博® BBproExtra® 叶绿体蛋白/胞质蛋白提取试剂盒用简便快速的方法即可从各种植物样本中快速提取得到叶绿体总蛋白。 本试剂盒适用于提取新鲜植物样本的叶绿体蛋白,用于冻存样本的提取时由于冻存过程中大部分叶绿体会被破坏,叶绿体蛋白回收率较低。 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解叶绿体膜组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活 性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA,与金属螯和层析等下游应用兼容。 本试剂盒采用非酶法提取,提取过程简单方便,速度快,可在1小时内完成,而且绝少交叉污染,但是蛋白回收率相比酶法较低。酶法提取制备的叶绿体总蛋白,回收率提高,蛋白纯度高,保持天然活性,但是耗时较长。如果需要更加快捷的提取试剂盒,可以选择非酶法的提取试剂盒,对提取速度没有要求的话,可以选择酶法提取试剂盒(相关产品BB-31792)。请根据实际需要选择试剂盒。 本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分,不可直接用于2D电泳,如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳,请使用贝博其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳,用脱盐柱脱盐处理(相关产品BB-38113)。 贝贝博® BBproExtra® 可以提供各种蛋白质提取、裂解、酶活测定、细胞器分离、免疫组织化学、蛋白表达、蛋白标记等蛋白质相关试剂盒产品。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对细胞膜、核、胞质、线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、外泌体等细胞不同部位的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对下游实验不同应用的试剂盒,例如用于Western Blotting和双向电泳等不同下游应用的试剂盒;含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒;专用于蛋白质谱检测、Pull-down实验的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒供选择使用。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体、外泌体等不同细胞器的提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供蛋白浓缩、脱盐、沉淀、透析、定量、电泳、纯化、检测等不同蛋白样品处理检测等相关试剂盒。

保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。 2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。 3.试剂拆封后请尽快使用完!
有效期
一年
检测方法
WB,IP等
适用样本
植物
产品应用
WB,IP等
仪器准备
1.离心机2.振荡器3.匀浆机/匀浆器4.涡旋混匀器5.移液器6.冰箱7.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液 (pH7.4,实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液(1X)) (phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS:约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl)2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管2.吸头3.一次性手套
使用注意事项
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。 2.蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。 3.实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。 4.蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。 5.如果试剂盒不能短时间内用完,蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。 6.可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
使用方法
1. 提取液准备:每200 μl预冷的蛋白提取液C中加入1μl蛋白酶抑制剂,混匀后置冰上备用。【注】: 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液,蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完,再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。 以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。2. 取200-500 mg新鲜植物样本叶片,洗净擦干后去除叶梗和粗脉。用手术剪刀尽可能剪碎。3. 加入1 ml -2 ml试剂A,用匀浆机/组织搅碎机/匀浆器充分匀浆。4. 将匀浆液用100 μm细胞筛过滤。【注】: 没有细胞筛的话,在4℃,稍微静置,让粗纤维,成团组织块等沉降,或者以低于100g力条件下离心1分钟,收集细胞上清,弃较大组织块沉淀。 有些含黏液较多的样品可能难以吸取,可以将1 ml吸头尖稍微剪掉一点使用。 液体量较少细胞筛不好过滤时可以补加2 ml PBS缓冲液后过滤。5. 将滤液在500×g条件下离心5分钟,弃沉淀,收集上清。6. 将上清在800×g条件下离心5分钟,弃沉淀,收集上清。7. 将上清3000×g力离心15分钟,上清部分即为胞质蛋白,收集沉淀。8. 将沉淀用1 ml试剂B重悬。9. 将悬液3000×g力离心15分钟,弃上清,收集沉淀。10. 在沉淀中加入200-300 μl叶绿体蛋白提取液C,充分混匀。11. 将蛋白提取液在4℃条件下振荡20-45分钟。【注】: 振荡时用振荡器/摇床的较低转速,保持液体稍微晃动即可。 没有振荡条件也可不振荡,置4℃静置,稍微延长试剂C处理时间,中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。 试剂C处理时间根据预实验结果调整。至叶绿体充分裂解,离心后沉淀体积减少。12. 在4℃,12000×g条件下离心15分钟。13. 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到叶绿体总蛋白。14. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。【注】: 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品:BB-3401。 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉,不要被细菌污染。
常见问题分析
1.蛋白浓度低? 处理部分样本时可能没有裂解完全,导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂C的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理,没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。 2.用什么方法定量蛋白? 建议用BCA法。不适合用Bradford法,因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份,导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系,则可以用Bradford法定量。 3.提取的蛋白具有活性吗? 本试剂盒不含有离子型去垢剂组份,不破坏蛋白的结构,没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏,蛋白均保持其天然构象和活性。
参考文献
1.Mengyun Hu et al. Transgenic expression of plastidic glutamine synthetase increases nitrogen uptake and yield in wheatPlant Biotechnology Journal 2018 (IF=9.803) Jinglun Zhao et al. Electrochemical behaviour of chloroplast, thylakoid, and PSII on the chitosan modified glassy carbon electrodeInternational Journal of Electrochemical Science 2020

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