细菌拟核结合蛋白提取试剂盒

BB-31517
选择规格
  • 50T
  • 100T
价格
  • ¥800元
  • ¥1500元
数量
产品概述 product description

贝博® BBproExtra® 细菌拟核(核质/类核)结合蛋白提取试剂盒可以从各种菌体中提取拟核结合蛋白,包括革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。提取过程简单方便。 常规做细菌总蛋白提取时对DNA结合蛋白的回收率较低,本试剂盒可以有效提高各种原核微生物的DNA结合蛋白的提取得率,针对性的富集拟核(核质/类核)蛋白。 本试剂盒含有的独特配方能够有效裂解细菌组份,试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高质量的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA,与金属螯和层析等下游应用兼容。 本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分,不可直接用于2D电泳,如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳,请使用贝博其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳,用脱盐柱脱盐处理(相关产品BB-38113)。 贝博® BBproExtra® 可以提供各种蛋白质提取、裂解、酶活测定、细胞器分离、免疫组织化学、蛋白表达、蛋白标记等蛋白质相关试剂盒产品。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对细胞膜、核、胞质、线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、外泌体等细胞不同部位的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对下游实验不同应用的试剂盒,例如用于Western Blotting和双向电泳等不同下游应用的试剂盒;含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒;专用于蛋白质谱检测、Pull-down实验的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒供选择使用。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体、外泌体等不同细胞器的提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供蛋白浓缩、脱盐、沉淀、透析、定量、电泳、纯化、检测等不同蛋白样品处理检测等相关试剂盒。

保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。 2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。 3.试剂拆封后请尽快使用完!
有效期
一年
检测方法
WB,IP等
适用样本
细菌
产品特点
 使用方便,从细菌中提取蛋白不需经过超声破碎等前处理。 含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。 紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。 本品可用于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。 本品不含EDTA,可以用于金属螯合层析等下游应用。
产品应用
WB,IP等
仪器准备
1.离心机2.振荡器3.匀浆机/匀浆器4.涡旋混匀器5.移液器6.冰箱7.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液 (pH7.4,实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液(1X)) (phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS:约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl)2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管2.吸头3.一次性手套
使用注意事项
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。 2.实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。 3.蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。 4.可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
使用方法
1. 提取液制备:每500 μl冷的提取液A中加入5 μl提取液B,充分混匀后置冰上备用。每200 μl冷的提取液C中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物,充分混匀后置冰上备用。【注】: 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液,蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完,再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。 以下步骤使用的提取液A为添加过试剂B的提取液A。 以下步骤使用的提取液C为添加过蛋白酶抑制剂的提取液C。2. 离心收集需要提取拟核蛋白的菌体,用PBS或生理盐水洗菌体2次。【注】: 洗涤离心后尽可能吸干洗涤液。3. 按每100-150 mg湿重菌体样本加入500 μl冷的提取液A(大约菌体和提取液体积比1:3-1:5,完全淹没菌体即可),吹打混匀,在室温振荡1-2小时,至菌体裂解,菌体沉淀减少。【注】: 振荡器或摇床的较低转速,保持液体稍微晃动即可。可以盖紧离心管,将离心管倾斜放置或者横置,以利于液体振荡。 如果没有持续振荡条件,也可直接静置1-2小时,中间每隔10分钟用移液器吹打混匀即可。4. 将菌液在2-8℃低温下16000×g离心15分钟,弃上清,留沉淀。5. 在沉淀中加入100-200 μl提取液C,充分混匀。6. 在2-8℃振荡20-30分钟。7. 在10000×g离心5分钟,取上清。即为拟核结合蛋白。8. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。【注】: 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品:BB-3401。 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉,不要被细菌污染。 可以根据需要用试剂C稀释蛋白样品,调整浓度。
常见问题分析
1.蛋白浓度低? 处理部分样本时可能没有裂解完全,导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理,没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。部分革兰氏阳性菌可能较难裂解,最好进行超声处理。 2.用什么方法定量蛋白? 建议用BCA法。不适合用Bradford法,因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份,导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系,则可以用Bradford法定量。 3.提取的蛋白具有活性吗? 本试剂盒不含有离子型去垢剂组份,不破坏蛋白的结构,没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏,蛋白均保持其天然构象和活性。
参考文献
1.HaiFeng Su et al. An integrated approach combines hydrothermal chemical and biological treatment to enhance recycle of rare metals from coal fly ashChemical Engineering Journal 2020 (IF=8.355)2.HF Su et al. A sequential integration approach using Aspergillus Niger to intensify coal fly ash as a rare metal poolFuel 2020 (IF=5.128)  3.H Shi et al. Highly efficient visible light driven photocatalytic inactivation of E. coli with Ag QDs decorated Z-scheme Bi2S3/SnIn4S8 compositeApplied Catalysis B: Environmental 2019 (IF=11.698)

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