活细胞/死细胞的染色

BBcellProbe^®  活细胞/死细胞染色探针采用公认的鉴别细胞内活力的参数酯酶活性和细胞膜完整性的方法检测活细胞和死细胞。

活细胞的特征是无处不在的细胞内酯酶活性，Calcein-AM是一种可对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，Calcein-AM由于在Calcein的基础上加强了疏水性，因此能够轻易穿透活细胞膜。当其进入到细胞质后，酯酶会将其水解为Calcein，聚阴离子染料Calcein很好地保留在活细胞内，几乎无荧光的Calcein-AM转变为绿色荧光的Calcein，在活细胞中发出均匀的强绿色荧光。

与其它同类试剂（如BCECF-AM和Carboxy-fluorescein diacetate）相比，Calcein-AM是最适合作为荧光探针去染活细胞的，因为它的细胞毒性很低，而且不会抑制任何的细胞功能，如增殖和淋巴球的趋化性。Calcein的激发和发射波长分别为490 nm和515 nm。Calcein -AM仅对活细胞染色。

作为核染色染料的PI不能穿过质膜完整的活细胞的细胞膜，它可以穿过死细胞膜的受损膜的无序区域而到达细胞核，并嵌入细胞的DNA双螺旋从而在死细胞中产生红色荧光(激发：488，545nm，发射：617 nm)。PI不会染色质膜完整的活细胞，仅对死细胞染色。

由于Calcein-DNA和PI-DNA都可被490 nm激发，因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。用545 nm激发，仅可观察到死细胞。根据以上特点，Calcein, AM和PI经常被结合用来作为活细胞和死细胞的双重染色。

本染色方法适用于荧光显微镜、荧光酶标仪等微孔板荧光扫描设备、流式细胞仪或者其它的荧光设备。

本染色方法适用于大多数真核细胞，包括贴壁细胞和某些组织样本，单不包括细菌和酵母样本。

需要注意的是，Calcein-AM/PI双染有效染色的前提是相应的细胞模型的活力变化是酯酶活性变化和质膜完整性变化这些物理和生化特性，不影响这些细胞特性的细胞毒性事件可能不能使用此方法进行准确评估。