细胞运动和定位研究需要专门的细胞示踪(细胞追踪)荧光探针,首先必须要对活细胞无毒性,同时还要有多种荧光染料颜色可供选择,以便匹配仪器的激光器和滤光片,并能与抗体或其他细胞分析探针共染。您可选择用于短时程细胞追踪或长时程细胞追踪的被动扩散染料,或能追踪5天甚至更久的荧光融合蛋白标记法。
短期细胞追踪
- 可快速加载标记(通常 15 分钟至 1 小时)
- 短期追踪(一般 3-6 代)
- 可适当耐光漂白/抗光淬灭
- 荧光信号亮度适中
- 信号分布于整个细胞
检测细胞运动和定位的最简单方法就是使用具有膜通透性的探针染料进入细胞并在加载后转变为膜非通透性物质。理想的细胞追踪染料需要可存留于分裂多代后的子细胞中,但不会通过接触转移到相邻细胞中。
在工作浓度下保持稳定且无细胞毒性,可稳定存留在细胞中,且在生理 pH 条件下可发出明亮的荧光。
选择短期细胞追踪产品
BB-441945 细胞膜染色试剂 Deep Red Dye
长时程细胞追踪
- 细胞加载标记一般需要 1 小时
- 可长时间追踪(通常 可追踪6-10 代)
- 具有较强的耐光漂白/抗光淬灭特性
- 荧光信号亮度高
- 在整个细胞中呈点状分布
细胞运动和定位的长时程追踪需要示踪荧光染料对光淬灭具有更强的抵抗性,并且能够在细胞中存留更多代。
长时程追踪需要更久的光稳定性,通常需要保留 6-10 代;染料标记加载时间在实验方案中不是特别的重要。
利用荧光蛋白进行细胞追踪/细胞示踪
- 荧光蛋白转导实验步骤简单,直接加入即可
- 放置过夜孵育
- 可长时程追踪细胞长达 2 周或超过 10 代
- 可选择红色或绿色两种荧光蛋白
- 可与其他荧光染料或蛋白标记同时多色分析
瞬时转导细胞可在细胞内的不同的特定位置表达荧光融合蛋白,在生长缓慢的细胞群中可表达至少 5 天或长达 2 周。标记后的细胞非常容易进行追踪检测,但并不是细胞群中的所有的细胞都能表达荧光蛋白。
采用荧光融合蛋白转导法追踪细胞可提供长时程追踪,但由于并非所有细胞都能转导,故可能不支持部分自动化检测技术。
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