2-8℃ 避光

开盖后组份按要求条件保存。

6个月

酶标仪

植物

1. 酶标仪
2. 研钵
3. 离心机
4. 水浴锅
5. 移液器

1. 纯水
2. 冰
3. 蛋白定量试剂盒

1. 离心管
2. 吸头
3. 一次性手套
4. 96孔板

试剂拆封后尽快用完；

1． 样本处理：
植物细胞：
先收集细胞到离心管内，离心后弃上清；
按照细胞数量（104个）：提取液A体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液A），超声波破碎细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；
12000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

植物组织：
按照组织质量（g）：提取液A体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g植物组织，加入1mL提取液A），进行冰浴匀浆。
12000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2． 检测步骤：
酶标仪预热30min以上，调节波长至550nm，纯水调零。


4. β-1,3-GA活性计算：
1、标准条件下测定回归方程为y = 0.0479 C标准--0.0192；
x为标准品浓度（mg/mL），
y为吸光值。
C标准：标准液浓度

2、细胞和组织中β-1,3-GA活力的计算
（1） 按蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白每小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。
β-1,3-GA(mg/h/mgprot)=[( ΔA +0.0192)÷0.0479×V1]÷(V1×Cpr)
=20.876×(ΔA +0.0192) ÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算
单位的定义：每g组织每小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。
β-1,3-GA(mg/h/g鲜重)=[( ΔA +0.0192)÷0.0479×V1]÷(W×V1÷V2)
=20.876×(ΔA +0.0192) ÷W

(3) 按细胞密度计算
单位的定义：每1万个细胞每小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。 β-1,3-GA(mg/h /104 cell)= [( ΔA +0.0192)÷0.0479×V1]÷(500×V1÷V2)
=0.0416×(ΔA+0.0192)

V1：加入反应体系中样本体积，0.035mL；
V2：加入提取液体积，1mL；
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
W：样本鲜重，g；
500：细胞总数，500万。