-20℃避光保存

1. 探针长期不用可以-20℃保存。
2. 探针需密封保存。减少开盖次数。
3. 避免反复冻融。可以根据需要分装后冻存。
4. 试剂拆封后请尽快使用完！

6个月

1.荧光酶标仪 2.荧光光度计 3.荧光显微镜 4. 流式细胞仪 5. 激光共聚焦

1. 悬浮细胞 2. 贴壁细胞

1. 使用方便：可用荧光酶标仪、荧光分光光度计或流式细胞仪检测；
2. 背景低，灵敏度高；
3. 线性范围宽，使用方便。

1. 激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪
2. 离心机
3. 移液器
4. 冰箱
5. 冰盒

PBS缓冲液/HBSS

1. 离心管
2. 吸头
3. 一次性手套

1. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
2. 荧光探针在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3. 荧光探针标记后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。
4. 探针标记完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的标记情况是否正常。
5. 尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。
6. BBoxiProbe® O96在光照和空气中易被氧化，注意避光密封保存。
7. 对不同的细胞和组织，应选择合适的孵育时间和浓度，以观察氧气浓度的变化。

BBoxiProbe® O96探针标记：
原位标记：仅适用于贴壁培养细胞。
1. 按照1:25-500用含血清培养基稀释BBoxiProbe® O96探针。
2. 去除细胞培养基，用PBS洗细胞一次。
3. 加入适当体积稀释好的BBoxiProbe® O96探针。加入的体积以能充分盖住细胞为宜，通常对于96孔板每孔加入200ul染色液，六孔板的一个孔加入稀释好的BBoxiProbe® O96探针不少于1毫升。
4. 在37℃细胞培养箱内避光孵育15-60分钟。
5. 用无血清细胞培养基洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的BBoxiProbe® O96探针。
6. 用PBS重悬细胞。
7. 检测细胞荧光。

收集后标记：悬浮细胞或贴壁细胞消化处理
1. 按照1:25-500倍用含血清培养基稀释BBoxiProbe® O96探针。
2. 离心移除培养基，用PBS洗细胞一次。
3. 细胞收集后悬浮于稀释好的BBoxiProbe® O96探针中，细胞浓度为1*106-2*107/毫升，37℃细胞培养箱内避光孵育15-60分钟。每隔3-5分钟颠倒混匀一下，使探针和细胞充分接触。
4. 用无血清细胞培养基洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的BBoxiProbe® O96探针。
5. 用PBS重悬细胞。
6. 检测细胞荧光。
共聚焦/荧光显微镜/酶标仪检测：
1. 对贴壁生长细胞或活组织，可直接在荧光显微镜下观察；对悬浮生长细胞，取25-50μl细胞悬液滴到一张显微载玻片上，再盖上一张盖玻片。
2. 荧光显微镜下，用蓝光激发，观察和拍摄细胞红色发射图像，氧浓度低的细胞被染成红色。

流式细胞仪分析：
对贴壁生长细胞，用胰酶消化制备成单细胞悬液；对悬浮生长细胞，直接收集细胞。用0.5~1 ml冰冷PBS重悬细胞（5~10万）。
采用455 nm波长激发，测定612 nm的发射。
氧浓度高的细胞有较低的荧光强度，低氧细胞有较强的红色荧光。