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产品概述
product description
贝博® BBoxiProbe® 酶氧气消耗检测试剂盒（Oxygen Consumption Rate Assay Kit）是利用贝博® 合成的特异性氧气荧光探针BBoxiProbe® R01来检测消耗氧气的酶耗氧活性情况变化的试剂盒。可以通过简单的混合基于荧光酶标仪便捷的直接进行耗氧量测定。
本试剂盒可以使用荧光酶标仪在标准微孔板上进行有氧反应的简单动力学测定。随着酶氧化还原作用的进行，溶解氧被消耗，样品中的氧气浓度降低，导致 BBoxiProbe® R01 分析的信号增加，从而实现对耗氧量的测定。
保存温度
2-8℃ 避光
注意事项
1.探针-20℃密封避光保存；
2.避免反复冻融。
3.注意防止氧化；
4.试剂拆封后请尽快使用完！
2.避免反复冻融。
3.注意防止氧化；
4.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
6个月
检测方法
荧光酶标仪
适用样本
分离的酶
产品特点
1.简单的“混合-检测”方案允许使用多种其他分析试剂盒进行多参数分析；
2.可逆转，能够观察耗氧量的瞬态和长时间变化；
3.可适配多数荧光酶标仪以及标准 96 孔和 384 孔；
4.以高通量的形式方便地测量；
5.无需等待专用设备空闲所需的实验室时间，也无需大额资金专用设备投入。
2.可逆转，能够观察耗氧量的瞬态和长时间变化；
3.可适配多数荧光酶标仪以及标准 96 孔和 384 孔；
4.以高通量的形式方便地测量；
5.无需等待专用设备空闲所需的实验室时间，也无需大额资金专用设备投入。
产品应用
荧光酶标仪
仪器准备
1.荧光酶标仪
须配备相应的波长过滤器和温度控制器。
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
须配备相应的波长过滤器和温度控制器。
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液 或者HBSS
2.对照试剂（选配，非必须）：
2.对照试剂（选配，非必须）：
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.荧光专用黑色96孔板
2.吸头
3.一次性手套
4.荧光专用黑色96孔板
使用注意事项
1. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
2. 以下操作以96孔板为例。其他培养容器或装置请根据实际情况调整试剂用量和检测方法。各试剂等比例调整即可。
3. BBoxiProbe® R01探针的信号变化直接取决于所测量酶的耗氧速率，建议尽可能使用每孔高的酶含量作为起点，否则可能检测不到酶的耗氧变化。
4. 并非所有酶类型都消耗足够用于检测的氧气。
5. 最好使用荧光专用的黑色培养板。实在没有的话可以采用透明板，注意孔间隔开，减少检测时各孔之间的光互相干扰。
6. 用于测定的所有仪器试剂溶液耗材均需37℃预热。
7. 添加氧气封闭液时注意避免产生气泡。
8. 尽可能使用多通道移液器添加试剂。
2. 以下操作以96孔板为例。其他培养容器或装置请根据实际情况调整试剂用量和检测方法。各试剂等比例调整即可。
3. BBoxiProbe® R01探针的信号变化直接取决于所测量酶的耗氧速率，建议尽可能使用每孔高的酶含量作为起点，否则可能检测不到酶的耗氧变化。
4. 并非所有酶类型都消耗足够用于检测的氧气。
5. 最好使用荧光专用的黑色培养板。实在没有的话可以采用透明板，注意孔间隔开，减少检测时各孔之间的光互相干扰。
6. 用于测定的所有仪器试剂溶液耗材均需37℃预热。
7. 添加氧气封闭液时注意避免产生气泡。
8. 尽可能使用多通道移液器添加试剂。
使用方法
操作步骤：
1. 准备待检测酶样。
酶的提取操作对检测很重要，尽量减少对酶的活性影响。
2. 加入100 μL 含酶检测液。
3. 加入1-4 μL BBoxiProbe® R01氧荧光探针，充分混匀。
4. （选做）可以在此处添加待测试化合物（通常为1-10 μL）（如果需要的话）。
5. 每孔加入100 μL氧气封闭液。
6. 然后用该96孔板进行荧光O2消耗变化情况检测。
激发波长455-468 nm，发射波长590-610 nm。每2分钟或3分钟读取一次。
7. 绘制耗氧率曲线。
【注】：
荧光强度值经空白对照校正。
8. 计算每个样品的斜率值。
【注】：
注意选择每个信号曲线的线性部分，避开起始的滞后数据，避开后期的平稳期。
线性回归确定每孔的斜率（OCR耗氧率）。
计算重复孔之间的平均值。
1. 准备待检测酶样。
酶的提取操作对检测很重要，尽量减少对酶的活性影响。
2. 加入100 μL 含酶检测液。
3. 加入1-4 μL BBoxiProbe® R01氧荧光探针，充分混匀。
4. （选做）可以在此处添加待测试化合物（通常为1-10 μL）（如果需要的话）。
5. 每孔加入100 μL氧气封闭液。
6. 然后用该96孔板进行荧光O2消耗变化情况检测。
激发波长455-468 nm，发射波长590-610 nm。每2分钟或3分钟读取一次。
7. 绘制耗氧率曲线。
【注】：
荧光强度值经空白对照校正。
8. 计算每个样品的斜率值。
【注】：
注意选择每个信号曲线的线性部分，避开起始的滞后数据，避开后期的平稳期。
线性回归确定每孔的斜率（OCR耗氧率）。
计算重复孔之间的平均值。
常见问题分析
1.耗氧率检测趋势跟预期的不一致？
检查酶取样和移液的一致性。
增加酶浓度。
将测定体积减少到60微升。
在某些较短的检测时间区间内，会出现荧光数据的波动情况，出现斜率下降或不变化，需要扩大到更长的时间范围内来分析耗氧率趋势。一般检测时间范围不少于30分钟。
温度对检测有较大影响。有条件的话，务必使用配有温度控制的酶标仪，仪器以及所有试剂和储备溶液均须使用前37℃预热。注意某些读板器的温度控制不一致，如果存在这种情况，请考虑将测定和平衡温度降低到30℃，避开外圈。
2.使用的酶类型灵敏度不够？
可以考虑以下改善方案：
增加酶标仪的增益（PMT）设置。
减少BBoxiProbe® R01氧荧光探针的体积（0.1-1 μL/孔）。
增加酶浓度。
将测定体积减少到60微升。
测量底部读数（如果有）。
调整TR-F焦距。
检查酶取样和移液的一致性。
增加酶浓度。
将测定体积减少到60微升。
在某些较短的检测时间区间内，会出现荧光数据的波动情况，出现斜率下降或不变化，需要扩大到更长的时间范围内来分析耗氧率趋势。一般检测时间范围不少于30分钟。
温度对检测有较大影响。有条件的话，务必使用配有温度控制的酶标仪，仪器以及所有试剂和储备溶液均须使用前37℃预热。注意某些读板器的温度控制不一致，如果存在这种情况，请考虑将测定和平衡温度降低到30℃，避开外圈。
2.使用的酶类型灵敏度不够？
可以考虑以下改善方案：
增加酶标仪的增益（PMT）设置。
减少BBoxiProbe® R01氧荧光探针的体积（0.1-1 μL/孔）。
增加酶浓度。
将测定体积减少到60微升。
测量底部读数（如果有）。
调整TR-F焦距。
参考文献
1.Jinjin Zhang et al.
Short-Chain Fatty Acids Promote Intracellular Bactericidal Activity in Head Kidney Macrophages From Turbot (Scophthalmus maximus L.) via Hypoxia Inducible Factor-1α
Frontiers in Immunology 2020 （IF 7.561）
2.HongGuang Ding et al.
Hypercapnia promotes microglial pyroptosis via inhibiting mitophagy in hypoxemic adult rats
CNS Neuroscience & Therapeutics 2020 （IF 5.243）
3.Huijuan Ma et al.
Formaldehyde reinforces pro-inflammatory responses of macrophages through induction of glycolysis
Chemosphere 2021 （IF 7.086）
Short-Chain Fatty Acids Promote Intracellular Bactericidal Activity in Head Kidney Macrophages From Turbot (Scophthalmus maximus L.) via Hypoxia Inducible Factor-1α
Frontiers in Immunology 2020 （IF 7.561）
2.HongGuang Ding et al.
Hypercapnia promotes microglial pyroptosis via inhibiting mitophagy in hypoxemic adult rats
CNS Neuroscience & Therapeutics 2020 （IF 5.243）
3.Huijuan Ma et al.
Formaldehyde reinforces pro-inflammatory responses of macrophages through induction of glycolysis
Chemosphere 2021 （IF 7.086）
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