酵母胞内pH值检测试剂盒

BB-48163
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产品概述 product description

贝博® BBcellProbe® 酵母细胞内pH值检测试剂盒采用BBcellProbe® P11胞内pH值荧光探针检测酵母胞内pH值的变化。BBcellProbe® P11是pH敏感的荧光染料，其在碱性条件下荧光强更高，反之酸性条件下变低，从而BBcellProbe® P11可被用于监测酵母胞内pH变化，见图一。
BBcellProbe® P11是一种可以穿透细胞膜的荧光染料，产生的荧光物质最大激发波长为 488 nm，最大发射波长为 528 nm，其在不同的pH值条件下发射的荧光强度不同，从而可以反映细胞内pH值得变化情况。
BBcellProbe® P11主要用于酵母、真菌等的细胞内pH水平检测。在有细胞内pH变化的细胞毒性、细胞凋亡、细胞粘附、药物抵抗、细胞趋化等过程中也可应用。实际检测时推荐使用的激发波长为488 nm左右，发射波长为 525～540 nm。可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测酵母胞内pH值的变化。
本试剂盒主要用于细胞内pH值变化的定性检测。但是在一定pH值范围内荧光强度与细胞内pH有良好的线性关系，据此可以用特定的pH值的标准缓冲液制备标准曲线，从而可以换算出细胞内的pH值的具体数据。
贝博® BBcellProbe® 可以提供各种细胞分析试剂盒。包括细胞凋亡、活性、增殖、毒性、活性氧、周期、细胞代谢、氧化应激、膜流动性、膜电位、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、胞外酸化、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种细胞检测试剂盒产品。
贝博® BBcellProbe® 可以为您提供各种细胞成像、细胞示踪与追踪试剂盒产品。包括各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。

保存温度
2-8℃ 避光
注意事项
1.探针长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。
2.探针A在冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
4.BBcellProbe® P11探针容易受潮，受潮后稳定性较差，注意干燥保存。
5.吸取BBcellProbe® P11探针母液时要用干燥的新吸头，不能使用含水的吸头。
6.未使用完的BBcellProbe® P11探针母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。
有效期
6个月
检测方法
荧光酶标仪/荧光光度计/流式细胞仪
适用样本
酵母
产品应用
荧光酶标仪/荧光光度计/流式细胞仪
仪器准备
1.荧光酶标仪或光度计或流式细胞仪
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
1.HBSS
2.HEPES
3.PBS 缓冲液
4.（备选，如果需要绘制标准曲线定量测定）
Nigericin sodium salt（相关产品BB-94002）；
5.pH标定用缓冲液
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.荧光专用黑色96孔板
使用注意事项
1. 预实验很重要。必须要做预实验，在正式实验之前取少量样本优化实验条件，并像正式样本一样认真进行，看实验结果是否可行，实验条件是否适合自己的样本。由于生物样本的多样性，不同样本的实验条件通常差异较大，同种细胞的不同模型下需要的实验条件也可能不同，为了避免浪费正式样本和试剂，一定要提前预实验优化实验条件。
2. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
3. pH探针在冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
4. BBcellProbe® P11探针容易受潮，受潮后稳定性较差，注意干燥保存。
5. 吸取BBcellProbe® P11探针母液时要用干燥的新吸头，不能使用含水的吸头。
使用方法
1. 染色工作液的配制：
根据样品数，用探针稀释液将P11探针进行10倍稀释， 然后再用PBS或HBSS缓冲液稀释 BBcellProbe® P11溶液10-20倍，配制成BBcellProbe® P11染色工作液。

2. 将 BBcellProbe® P11染色工作液加入已处理好的细胞，在37℃孵育60-120 分钟。
3. 用PBS洗涤细胞2-3次。用PBS重悬细胞。
4. 然后用该细胞进行荧光细胞内pH变化情况检测。
激发波长 488-506 nm，发射波长526-536 nm。
【注】：
 荧光强度增加则细胞内pH值增加，荧光强度降低则细胞内pH值下降。
 必须使用荧光检测专用黑色96孔板。
参考文献
1.Xingyue Bao et al.
Ornithine decarboxylation (ODC) system of Shewanella baltica regulates putrescine production and acid resistance
J Food Prot 2020

2.Weitao Su et al.
Interaction between PHB2 and Enterovirus A71 VP1 Induces Autophagy and Affects EV-A71 Infection
Viruses 2020

3.Tie Zhu et al.
SNX11 Identified as an Essential Host Factor for SFTS Virus Infection by CRISPR Knockout Screening
Virologica Sinica 2019
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