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细胞粘附是指细胞与细胞之间及细胞与细胞外基质之间的粘附，细胞粘附是细胞维持形态结构与功能的生物现象，是细胞间信息交流的一种形式。而信息交流的可溶递质称细胞粘附分子(cell adhesion molecule,CAM)。细胞粘附分子是参与细胞与细胞之间及细胞与细胞外基质之间相互作用的分子。 是一类独立的分子结构，是通过识别与其粘附的特异性受体而发生相互间的粘附现象。 细胞的生长、发育、分化及代谢状态和外界细胞因子、炎症介质反应等均可以影响细胞粘附，细胞粘附也可能是肿瘤细胞易发生浸润、转移等现象的分子基础。 贝博® BBcellProbe® 细胞粘附检测试剂盒含全套试剂，通过贝博活细胞绿色荧光探针BBcellProbe® C07染色粘附的活细胞数量来反应细胞的粘附能力变化。激发和发射波长分别为488nm和520nm 本试剂盒含有包被液，使用方便快速，可以进行高通量检测。本试剂盒使用荧光法进行检测，如果需要比色法检测的，请选用贝博货号为BB-48120的试剂盒。 贝博® BBcellProbe® 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以为您提供各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。
2.试剂B注意防潮；避免反复冻融。
3.染色液B 2-8℃避光保存，长期不用-20℃避光保存。
4.染色液B为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
5.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
2.激光共聚焦
3.荧光酶标仪
2.快速：最快1小时内即可完成实验；
3.灵敏：数据可靠，重现性好，线性范围更宽；
4.准确：试剂本身稳定性高，实验结果稳定可靠。
2.激光共聚焦
3.荧光酶标仪
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
2.吸头
3.一次性手套
2.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。离心力在不损失细胞的前提下尽可能小，重悬细胞是动作要轻柔，避免多次反复的激烈吹打。不用涡旋振荡器。
3.染色培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异。如果要使用24孔板或6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入染色液B。
4.有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔间的差异。加染色液B试剂时，建议斜贴着培养板壁加，不要插到培养基液面下加，容易产生气泡，会干扰F值读数。
5.染色液B为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。融解后离心至管底部再打开螺旋盖。
6.由于试剂B的工作液稳定性比较差，染色工作液必须现配现用，并且在当天用完。
7.试剂B对湿度非常敏感，试剂B溶液每次取完需要量后，必须紧紧密封盖子。建议根据单次用量，分装密封保存。不可使用含水的吸头。
8.试剂B母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。
1. 96孔板每孔加入100ul包被液。
2. 将培养板置2-8°C过夜。
3. 移除包被液。
4. 干燥培养器皿。通风橱内吹风数分钟即可完成干燥，至肉眼观察完全干燥。
5. 用洗涤液洗涤1-3次。
细胞接种：
1. 待测定细胞处理好后，用胰酶消化，PBS洗涤，然后用相应培养基重悬，制成细胞悬液。
2. 按5×104细胞/孔接种96孔板，建议设3-5个复孔。同时设立对照组，即孵育后不弃上清组。
3. 放37℃培养箱孵育30分钟-1小时。
4. 取出培养板，吸弃培养基。
5. 然后用相应的培养基洗涤2-3次。
6. 每孔加入100ul新鲜无血清培养基。
粘附率检测：
1. 染色工作液的配制：
从冰箱中取出荧光染色试剂，室温溶解后混匀。
根据样品数按下列比例配制染色工作液。
用37℃培养箱预热缓冲液（如HBSS）或无血清培养基将BBcellProbe® C07荧光染料10-50倍稀释，配制成染色工作液。
2. 96孔板每孔加入10ul细胞染色液B工作液，37℃避光孵育15-30分钟。
3. 加入100ul HBSS或无血清培养基。
4. 用荧光酶标仪/激光共聚焦检测结果。最大激发波长488nm，最大发射波长分别为520nm。
5. 细胞粘附率计算。
将各测试孔的荧光强度值减去空白孔（未加细胞孔）荧光强度值。各重复孔的荧光强度值取平均数。
细胞粘附率% =（（F待测细胞 - F空白）/（F对照细胞 - F空白））×100
Protective effect of KLF15 on vascular endothelial dysfunction induced by TNF‑α
Molecular Medicine Reports 2018
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