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产品概述
product description
贝博® BBcellProbe® 钙离子检测试剂盒采用BBcellProbe® C91细胞内钙离子浓度荧光探针检测钙离子浓度水平的变化。 钙离子浓度变化是活细胞接受外界刺激后产生级联反应的重要信息传递方式，因此细胞内钙离子检测是信号转导G蛋白偶联受体（GPCR）介导的相关药物筛选以及其他相关实验中非常重要的一种研究手段。 BBcellProbe® C91具有极高的细胞渗透性，经过简单孵育即可实现细胞加载。穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成不易透过细胞膜的C91新产物，从而被滞留在细胞内。C91游离配体有蓝色荧光。但是，当它与细胞内钙离子结合后荧光大幅度减弱，最大激发波长为 355nm，最大发射波长为 475nm。可以使用荧光显微镜、酶标仪、激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度的变化。 贝博® BBcellProbe® 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以为您提供各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。
保存温度
-20℃ 避光
注意事项
1.染料长期不用可以-20℃保存。
2.避免反复冻融。可以根据需要小量分装保存。
3.染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
4.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否则容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
5.试剂拆封后请尽快使用完！
2.避免反复冻融。可以根据需要小量分装保存。
3.染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
4.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否则容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
5.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
6个月
检测方法
1.流式细胞仪
2.荧光显微镜
3.激光共聚焦
2.荧光显微镜
3.激光共聚焦
适用样本
1.悬浮细胞
2.贴壁细胞
2.贴壁细胞
产品应用
流式细胞仪/荧光显微镜/激光共聚焦
仪器准备
1.激光共聚焦/荧光显微镜//光度计/流式细胞仪
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液 2.HBSS
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
2.钙离子染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
3.探针为了便于观察防止误操作导致损失，在试剂盒中时是采用透明管包装，收到后可以离心移入干燥黑色避光密封管或者用铝箔包裹避光。
4.荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
5.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
6.染色后立即进行分析。
7.BBcellProbe® C91探针容易受潮，稳定性较差，注意干燥保存。从冰箱取出后，请确认在干燥的环境放至室温后再开封。
8.BBcellProbe® C91探针母液时要用干燥的新吸头，不能使用含水的吸头。
9.未使用完的BBcellProbe® C91探针母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。母液遇水极易分解，如果长期不用，建议根据每次使用量分装保存，用封口膜封口，并用铝箔纸包裹，放在一个密闭性能好的塑料袋中，并放入一包干燥剂，在≤-20℃密封避光保存。
10.BBcellProbe® C91探针工作液含水，配制后不可以长期保存，须现配现用。
11.BBcellProbe® C91融解后离心至管底部再打开螺旋盖，防止开盖时损失。
12.可以在染色工作溶液中加入20% Pluronic F127溶液（可选步骤），Pluronic F127 可以帮助BBcellProbe® C91更快进入细胞，不建议在Pluronic F127中长期保存BBcellProbe® C91溶液。
13.标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先确定最佳条件。在正式实验前先摸索一下细胞量、钙离子荧光探针的终浓度、培养时间等，找到最佳实验条件。以下方法仅供参考。
2.钙离子染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
3.探针为了便于观察防止误操作导致损失，在试剂盒中时是采用透明管包装，收到后可以离心移入干燥黑色避光密封管或者用铝箔包裹避光。
4.荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
5.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
6.染色后立即进行分析。
7.BBcellProbe® C91探针容易受潮，稳定性较差，注意干燥保存。从冰箱取出后，请确认在干燥的环境放至室温后再开封。
8.BBcellProbe® C91探针母液时要用干燥的新吸头，不能使用含水的吸头。
9.未使用完的BBcellProbe® C91探针母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。母液遇水极易分解，如果长期不用，建议根据每次使用量分装保存，用封口膜封口，并用铝箔纸包裹，放在一个密闭性能好的塑料袋中，并放入一包干燥剂，在≤-20℃密封避光保存。
10.BBcellProbe® C91探针工作液含水，配制后不可以长期保存，须现配现用。
11.BBcellProbe® C91融解后离心至管底部再打开螺旋盖，防止开盖时损失。
12.可以在染色工作溶液中加入20% Pluronic F127溶液（可选步骤），Pluronic F127 可以帮助BBcellProbe® C91更快进入细胞，不建议在Pluronic F127中长期保存BBcellProbe® C91溶液。
13.标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先确定最佳条件。在正式实验前先摸索一下细胞量、钙离子荧光探针的终浓度、培养时间等，找到最佳实验条件。以下方法仅供参考。
使用方法
1. 染色工作液的配制：
用 HBSS 稀释 BBcellProbe® C91溶液500倍-1000倍，配制成BBcellProbe® C91染色工作液。
2. 收集培养好的待测细胞样本，用HBSS洗涤细胞3次。
3. 离心去上清后，将 BBcellProbe® C91染色工作液加入细胞，在37℃孵育20 -60分钟。
4. 用HBSS洗涤细胞2-3次。
5. 用HBSS重悬细胞。在37℃下再继续孵育20-40分钟。
6. 然后用该细胞进行荧光钙离子检测。
激发波长 355nm，发射波长475nm。
钙离子增加，荧光减弱。
用 HBSS 稀释 BBcellProbe® C91溶液500倍-1000倍，配制成BBcellProbe® C91染色工作液。
2. 收集培养好的待测细胞样本，用HBSS洗涤细胞3次。
3. 离心去上清后，将 BBcellProbe® C91染色工作液加入细胞，在37℃孵育20 -60分钟。
4. 用HBSS洗涤细胞2-3次。
5. 用HBSS重悬细胞。在37℃下再继续孵育20-40分钟。
6. 然后用该细胞进行荧光钙离子检测。
激发波长 355nm，发射波长475nm。
钙离子增加，荧光减弱。
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