2-8℃

开盖后组份按要求条件保存。

3个月

分光光度计

细胞/组织

分光光度计

1.分光光度计
2.研钵
3.离心机
4.移液器
5.1ml比色皿

1.蒸馏水
2.冰
3.蛋白定量试剂盒

1.离心管
2.吸头
3.一次性手套

1.如果一次性测定样本数较多，可将试剂C、D、E、F按比例配制成混合液，现用现配。
2.反应过程中注意避光。
3.由于每个管需要设定一个对照管，本试剂盒50管可测24份NADP+或NADPH，二者都测则可测12份。
4.最低检测限为1nmol/mL或1nmol/g组织鲜重或者0.01nmol/mgprot

试剂的配制：
试剂D：临用时将粉剂D加入4ml蒸馏水，充分混匀；余下的可以4℃保存一周；
试剂E：临用时将粉剂E加入4ml蒸馏水，充分混匀；余下的可以4℃保存一周；
试剂F：临用时将粉剂F加入4ml蒸馏水，充分混匀；余下的可以4℃保存一周；

组织样本的NADP+和NADPH提取：
1.NADP+的提取:
按照组织质量(g):酸性提取液体积A(mL)为1:5~10 的比例(建议取约0.1g组织，加入1ml
酸性提取液A，冰浴研磨，煮沸5min(盖紧，以防止水分散失);冰浴中冷却后，10000g4℃
离心10min;取上清液至另一新的离心管中，加入等体积的碱性提取液B使之中和，混
匀，10000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2.NADPH 的提取:
按照组织质量(g):碱性提取液体积B(mL)为1:5~10的比例(建议取约0.1g组织，加入1mL
碱性提取液B)，冰浴研磨，煮沸5min(盖紧，以防止水分散失);冰浴中冷却后，10000g4℃
离心10min;取上清液至另一新的离心管中，加入等体积的酸性提取液A使之中和，混
匀，10000g4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。

细胞中NADP*和NADPH 的提取:
1.NADP+的提取:
先收集细胞到离心管内，弃上清，按照细胞数量(104个):酸性提取液体积A(mL)为
500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL酸性提取液A)，超声波破碎1min(冰浴，
强度20%或200W，超声2s，停1s)，煮沸5min(盖紧，以防止水分散失);冰浴中冷却后，
10000g4℃离心10min;取上清液至另一新的离心管中，加入等体积的碱性提取液B使之
中和，混匀，10000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2.NADPH 的提取:
先收集细胞到离心管内，弃上清，按照细胞数量(104个):碱性提取液体积B(mL)为
500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1ml 碱性提取液B)，超声波破碎1min(冰浴，
强度20%或200W，超声2s，停1s)，煮沸5min(盖紧，以防止水分散失);冰浴中冷却后，’
10000g4℃离心10min;取上清液至另一新的离心管中，加入等体积的酸性提取液A使之
中和，混匀，10000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

样本检测：
在1.5ml棕色EP管中按下表依次加样，反应过程需要避光：

混匀，波长570nm，光径1cm，双蒸水调零测定对照吸光值A1和样品管吸光值A2，计算ΔA=A2-A1.