辅酶Q(Coenzyme Q,CoQ)是一种生物体内广泛存在的脂溶性醌类化合物,故又称泛醌,在体内呼吸链中质子移位及电子传递中起重要作用,是呼吸链中重要的递氢体,它是细胞呼吸和细胞代谢的激活剂,也是重要的抗氧化剂和非特异性免疫增强剂。对多种酶有激活作用。不同生物体来源的辅酶Q其侧链异戊烯单位的数目不同,人类和哺乳动物是10个异戊烯单位,故称辅酶Q10。辅酶Q10是辅酶Q类的重要成员之一,它们与线粒体内膜相结合,广泛参与体内的生物代谢过程。 贝博®辅酶Q10(CoQ10)检测试剂盒(微板法)其检测原理是待测样品在碱性条件下,EC取代了CoQ10上的甲氰基,形成蓝色化合物,通过酶标仪测定620nm处吸光度值,根据标准曲线即可测出辅酶Q10的含量。本产品可用于测定花生、牛肉、沙丁鱼、保健品等食品中的CoQ10的含量。 试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。 贝博® BBcellProbe® 可以提供各种细胞检测试剂盒。包括细胞凋亡、活性、增殖、毒性、活性氧、周期、细胞代谢、氧化应激、膜流动性、膜电位、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、胞外酸化、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种细胞检测试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以为您提供各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品,以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。
2.比色皿或96孔板
2.在皂化过程中,震荡不要剧烈,以免形成乳化层;
3.辅酶Q10检测缓冲液如果出现浑浊或絮状物,应弃用;
4.辅酶Q10标准梯度应准确,尽量减少不必要的误差;
5.EC溶液有一定毒性,请小心操作;
6.检测标准品时,按加样表混合后,2min内即出现明显的蓝色变化并逐渐加深,20min后蓝色开始变浅,30min后逐渐呈黄绿色。620nm检测数据表明,随着时间的延长,OD值在不断下降,对应的颜色也已发生变化,特别是高浓度的标准品变化比较大。因此,应在出现最深的蓝色结果且稳定的时间段内尽快检测,而且建议每次同时检测标准品(0.3~0.5mg/ml)和样品。
7.如有条件,最好用酶标仪检测,减少因检测时间导致的误差;
标准品的稀释:用试剂C:EC缓冲液稀释试剂A:辅酶Q10标准(5mg/ml)至0.5mg/ml,-20℃保存备用;
二、样品的准备:
取新鲜动物心脏或肝脏等样品,采用醇碱皂化法、溶剂皂化法等(参见附录)提取适量的辅酶Q10提取液,-20℃保存备用;
三、辅酶Q10加样:
按照下表设置空白、标准、样品,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免气泡的产生。如果样品中的辅酶Q10浓度过高,可以减少样品用量或用试剂C:EC缓冲液稀释后再进行测定。
四、辅酶Q10测定:
混匀,室温避光孵育3~5min,以空白调零,比色杯光径1cm,分光光度计或酶标仪600~640nm处检测标准管或样品管的吸光度。
五、计算:
液体样品辅酶Q10浓度(mg/ml)= A样品/A标准 x 0.5
液体样品辅酶Q10含量(mg)= A样品/A标准 x 0.5 x VT
每100g固体样品辅酶Q10含量(mg/g)= A样品/A标准 x 0.5 x VT x 100/m
公式中:
A样品为样品管的吸光度;
A标准为标准管的吸光度;
0.5为辅酶Q10标准的浓度(mg/ml);
VT为辅酶Q10提取液的总体积(ml);
m为样品的实际用量(g)
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