2-8℃ 避光

1. 正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。
2. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
3. 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
4. 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
5. 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
6. 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

6个月

酶标仪

血清/血浆/组织/细胞

酶标仪

1.酶标仪
2.离心机
3.漩涡混匀器
4.移液器

1.纯水
2.蛋白定量试剂盒

1.96孔板
2.吸头
3.一次性手套
4.离心管

1.待测样本一般采用血清，2-8℃可稳定3天，-20℃可稳定1个月；
2.胺基质液应注意防止挥发，可以-20℃保存，12个月有效；
3.用含有柠檬酸、EDTA抗凝血本本法测定有一定的干扰；
4.实验全程注意控制温度和pH值；
5.加入CP终止液后，应立即混匀以终止酶促反应；

样本的准备：
细胞或组织样品：
A. 细胞：
1. 收集待测细胞到离心管内，离心后弃培养基上清；
2. 按照1-10*106个细胞数量加入500 μl体积匀浆液D，匀浆器充分匀浆或超声破碎细胞（冰浴，功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 10 s，重复 30次）；
3. 8000 g 4℃离心 10 min。
4. 取上清，置冰上待测。
5. 用BCA或Bradford测定上清蛋白含量（g/L）。


B. 组织样本：
1. 称取0.1~0.2 g样品，加入500 μl体积匀浆液D，充分匀浆；
2. 8000 g 4℃离心 10 min。
3. 取上清，置冰上待测。
4. 用BCA或Bradford测定上清蛋白含量（g/L）。

血浆、血清和尿液样本：
血浆、血清、尿液样本按常规方法取样，可以直接用于CP检测。


CP加样：
按下表设置对照孔和样本孔，在离心管或小试管中按顺序依次加入溶液，并注意避免产生气泡。
加入物（ml） 对照孔 样本孔
血浆、血清等样本 --- 0.025
CP检测缓冲液 0.4 0.4
胺基质液 0.1 0.1
充分混匀，37℃水浴或气浴20分钟
CP终止液 1 1
样本或纯水 0.025 ---
充分混匀，室温静置5分钟。
【注】：
 对照管一般只需做1~2管。
 如果样本中铜蓝蛋白浓度过高，可以减少样本用量或用CP检测缓冲液稀释后再进行测定。
 应记录实际样本用量，并且根据实验方案调整计算公式。

CP测定：
取200 ul以上液体于96孔板中。
酶标仪540 nm处测定各孔吸光度。

CP计算：
CP国际活力单位的定义：在最适pH和底物浓度下，1min能催化1 umol底物所需的CP量为一个国际活力单位。

计算公式：
细胞/组织：
CP活力（U/g）= 样本孔—对照孔 x 1 x 反应液总体积（1.525ml）x1000÷样品的蛋白浓度（g/L）
4.73 20 取样量（0.025ml）

液体样本：
CP活力（U/L）= 样本孔 — 对照孔 x 1 x 反应液总体积（1.525ml）x1000
4.73 20 取样量（0.025ml）

【注】：
 4.73：吸光系数值
 20：反应时间（min）