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产品概述
product description
贝博® BBcellProbe®β-半乳糖苷酶(GAL)检测试剂盒是利用β-GAL 分解对-硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm 有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算β-GAL 活性。 β-GAL(EC 3.2.1.23)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，能够催化β半乳糖苷化合物中β半乳糖苷键水解，此外还具有转半乳糖苷的作用。β-GAL不仅可为植物的快速生长释放储存的能量，还能在正常的多糖代谢、细胞壁组分代谢以及衰老时细胞壁降解过程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖残基的水解，释放自由的半乳糖。 贝博® BBcellProbe® 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以为您提供各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。
保存温度
2-8℃ 避光
注意事项
开盖后组份按要求条件保存。
有效期
3个月
检测方法
分光光度计
适用样本
细胞，培养液，细菌
产品应用
分光光度计
仪器准备
1.分光光度计
2.恒温水浴锅
3.涡旋混匀器
4.离心机
5.移液器
6.研钵
7.冰箱
8.冰盒
2.恒温水浴锅
3.涡旋混匀器
4.离心机
5.移液器
6.研钵
7.冰箱
8.冰盒
试剂准备
1.生理盐水
2.纯水
2.纯水
耗材准备
1.比色皿
2.试管
3.吸头
4.一次性手套
2.试管
3.吸头
4.一次性手套
使用注意事项
1.试剂A干粉开盖使用前先敲入瓶底部，防止开盖时洒落导致损失。
使用方法
1. 试剂配制：
试剂A临用前每瓶加入5mL 蒸馏水，充分溶解备用。
2. 样本处理
粗酶液提取：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；15000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。匀浆液15000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
培养液等液体样本：直接检测。
3. 测定
分光光度计预热30min 以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。
按下表在试管中加入试剂，同时做空白管（无样品液）、样品对照管（无ELLMAN试剂），空白管做一个即可，对照管每个样品均做。
充分混匀。在400nm，测定各管OD值。
计算ΔA=A 测定-A 对照。
【注】：
每个测定管需设一个对照管。
4. β-GAL 活性计算：
标准条件下测定的回归方程为y =0.00543x -0.0027；
x 为标准品浓度（nmol/mL），y 为吸光值。
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg 组织蛋白每分钟产生1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-GAL 活力(nmol/min/mg prot)
=[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V 反总]÷(V 样×Cpr)÷T
=61.39×(ΔA+0.0027) ÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g 组织每分钟产生1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-GAL 活力(nmol/min /g 鲜重)
＝[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)÷T
=61.39×(ΔA+0.0027) ÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1 万个细菌或细胞每分钟产生1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-GAL 活力(nmol/min /104 cell)
=[(ΔA+0.0027) ÷0.00543×V 反总]÷(500×V 样÷V 样总)÷T
=0.123×(ΔA +0.0027)
（4）按液体体积计算：
单位的定义：每mL 液体样本每分钟产生1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-GAL 活力(nmol/min /mL)
＝[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V 反总]÷V 样÷T
=61.39×(ΔA+0.0027)
【注】：
V 反总：反应体系总体积，0.5mL；
V 样：加入反应体系中样本体积，0.05mL；
V 样总：加入提取液体积，1mL；
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
W：样本质量，g；
500：细胞或细菌总数，500 万；
T：反应时间，30min。
试剂A临用前每瓶加入5mL 蒸馏水，充分溶解备用。
2. 样本处理
粗酶液提取：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；15000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。匀浆液15000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
培养液等液体样本：直接检测。
3. 测定
分光光度计预热30min 以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。
按下表在试管中加入试剂，同时做空白管（无样品液）、样品对照管（无ELLMAN试剂），空白管做一个即可，对照管每个样品均做。
充分混匀。在400nm，测定各管OD值。
计算ΔA=A 测定-A 对照。
【注】：
每个测定管需设一个对照管。
4. β-GAL 活性计算：
标准条件下测定的回归方程为y =0.00543x -0.0027；
x 为标准品浓度（nmol/mL），y 为吸光值。
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg 组织蛋白每分钟产生1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-GAL 活力(nmol/min/mg prot)
=[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V 反总]÷(V 样×Cpr)÷T
=61.39×(ΔA+0.0027) ÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g 组织每分钟产生1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-GAL 活力(nmol/min /g 鲜重)
＝[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)÷T
=61.39×(ΔA+0.0027) ÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1 万个细菌或细胞每分钟产生1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-GAL 活力(nmol/min /104 cell)
=[(ΔA+0.0027) ÷0.00543×V 反总]÷(500×V 样÷V 样总)÷T
=0.123×(ΔA +0.0027)
（4）按液体体积计算：
单位的定义：每mL 液体样本每分钟产生1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-GAL 活力(nmol/min /mL)
＝[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V 反总]÷V 样÷T
=61.39×(ΔA+0.0027)
【注】：
V 反总：反应体系总体积，0.5mL；
V 样：加入反应体系中样本体积，0.05mL；
V 样总：加入提取液体积，1mL；
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
W：样本质量，g；
500：细胞或细菌总数，500 万；
T：反应时间，30min。
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