BBcellProbe® γ-谷氨酰基转移酶(GGT)检测试剂盒(重氮比色法)以萘胺盐为底物,在GGT催化下γ-谷氨酰基转移到甘肽分子上同时释放出游离的α-萘胺,后者与重氮盐反应产生红色化合物,其颜色深浅与GGT浓度呈正比,通过比色法检测530 nm处吸光度,进而计算酶的活性。 L-γ-谷氨酰基转移酶(GGT或γ-GT)是催化γ-谷氨酰基移换反应的酶,γ-谷氨酰基从谷胱甘肽或其他含γ-谷氨酰基物质中转移到另一肽或氨基酸分子上。GGT主要存在于肝细胞膜和微粒体上,参与谷胱甘肽的代谢,血清中主要来自肝胆系统,当肝内合成亢进或胆汁排出受阻时,血清中GGT往往容易增高。 本试剂盒适用于测定各种动物血清(浆)、组织等样本中的GGT的活力。 本试剂盒测仅用于科研领域,不可用于临床诊断或其他用途。 贝博® BBcellProbe® 可以提供各种细胞分析试剂盒。包括细胞凋亡、活性、增殖、毒性、活性氧、周期、细胞代谢、氧化应激、膜流动性、膜电位、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、胞外酸化、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种细胞检测试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以为您提供各种细胞成像、细胞示踪与追踪试剂盒产品。包括各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品,以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以提供各种细胞、组织染色,免疫组织化学,细胞培养等相关试剂盒产品。
2.水浴锅
3.漩涡混匀器
4.移液器
5.离心机
6.比色皿
2.BCA蛋白浓度测定试剂盒(组织样本)
2.吸头
3.一次性手套
抑制酶活性(10~15%);
2.尽量避免使用溶血样品;
3.GGT活力20~100(U/L)颜色由淡紫红色到紫红色梯度变化;
1. GGT显色工作液的配制:
取GGT显色剂1支,加纯水1 ml,充分溶解,即为GGT显色储备液(该GGT显色储备液为过量,2-8℃保存,30天有效);
临用前,按GGT显色储备液:显色稀释液=1:1000的比例混合,即为GGT显色工作液,现配现用;
2. 系列萘胺标准的配制:
取适量的萘胺标准(1.5 mmol/L) ,按萘胺标准(1.5 mmol/L):GGT检测缓冲液=1:9的比例混合,即为萘胺标准工作液-萘胺标准(0.15 mmol/L)。
按下表配制系列标准品:
样本的前处理:
1. 血清、血浆样本:
血清、血浆按常规方法制备,可以直接用于本试剂盒的测定,-20℃保存,,用于GGT的检测;
2. 细胞或者组织样本:
取适量的续保或者组织进行匀浆,低速离心取上清,-20℃保存,用于GGT检测;
3. (选做)样本准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定下蛋白浓度,以便后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的GGT含量;
测定操作步骤(仅供参考)
(一)、操作表
1. GGT酶促反应:
按下表设置标准管、对照管、样本管、溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡;如果样品的酶活性过高,可减少样本用量或者适当的稀释样本再进行测定:
2. GGT测定:
混匀,室温放置10 min。以“0”号标准管调零,样品测定以“对照管”调零,比色皿光径1 cm,分光光度计测定530 nm处标准管、样本管的吸光度。
(二)、计算公式:
以标准管活力单位(U/L)为横坐标,以吸光度为纵坐标,绘制标准曲线,在标准曲线上查出带的样本的GGT酶活力单位。
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