天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒

BB-47449
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产品概述 product description

转氨酶是催化α-氨基酸和α-酮酸之间氨基转换反应的一组酶，天门冬氨酸氨基转移酶(AST)旧称谷草转氨酶(GOT)主要存在于心肌、骨骼肌、肝脏，以心肌含量最高，肝脏次之。AST能够催化天门冬氨酸和a-酮戊二酸的氨基转移作用，形成谷氨酸和草酰乙酸。 贝博天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒(赖氏微板法)其检测原理是天门冬氨酸氨基转移酶(AST)催化天门冬氨酸与α-酮戊二酸之间的氨基转移反应，在ALT催化下，其反应公式如下： L-天门冬氨酸+α-酮戊二酸→草酰乙酸+L-谷氨酸 二硝基苯肼与α-酮酸反应，生成相应的二硝基苯腙，在碱性条件下，二硝基苯腙的吸收光谱有差异，通过分光光度计检测在500-520nm处差异最大，以等摩尔浓度计算出丙酮酸的生成量，进而计算酶的活性。100T该检测试剂盒可检测50个样本（不含标准品）。 本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 贝博® BBcellProbe® 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以为您提供各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。

保存温度
2-8℃ 避光
注意事项
开盖后组份按要求条件保存。
有效期
6个月
检测方法
微孔板，酶标仪
适用样本
血清、血浆、细胞、组织
产品应用
微孔板，酶标仪
仪器准备
1.酶标仪
2.离心机
3.水浴锅
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.蒸馏水
耗材准备
1.离心管
2.96孔板
3.吸头
4.一次性手套

使用注意事项
1.二硝基苯肼显色液溶解以后，如果仍然有结晶析出，应弃用。
2.由于赖氏法的特点，在绘制标准曲线时每个点最好做三管的重复测定，求出各标准管的吸光度均值，减去“0”号管吸光度均值后，对照赖氏单位绘制标准曲线。
3.血清中AST活性在室温可以保存2天，4℃保存1周，-20℃保存1个月。
4.成批样本测定时，一般无需每份样本都做自身血清对照，以试剂空白管代替即可。但对于超过正常范围的血清样本，应该进行复测。复测时，每份样本都应做自身血清对照。
5.严重黄疸、脂血或溶血的血清，可能会引起测定管吸光度增高，因此检测该类样本时应做自身血清标本对照。
6.当样本的酶活力大于190卡门单位时，应将样本进行5-10倍稀释后再进行测定。
使用方法
准备样品：
① 血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，
-20℃保存1个月有效，用于AST/GOT的检测。
② 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃保存1个
月有效，用于AST/GOT的检测。
③ (选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续
计算单位蛋白重量组织或细胞内的AST/GOT含量。

制作AST标准曲线：
1. 取丙酮酸标准品一支，准确加入丙酮酸标准品稀释液1ml，配制成丙酮酸标准品100mM，4℃保存备用。
2. 临用前，取适量100mM丙酮酸标准品和标准品稀释液按1：49的比例混合，配制成2mM的丙酮酸标准品。
3. 按下表制备标准曲线。
4. 混匀，向各管中加入二硝基苯肼显色液20ul，混匀37℃孵育20分钟后，加入AST显色基液200μl，混匀。
5. 室温放置5分钟，酶标仪505nm处，以蒸馏水调零，读取各孔吸光度。各孔吸光度均减去”0”号孔吸光度，所得吸光度差值(纵坐标)与对应的卡门酶活力单位(横坐标)作图。

AST酶促反应：
1. 按照下表设置对照孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
2. AST检测：混匀，室温放置5min。酶标仪505nm处检测吸光度，以蒸馏水调零，读取各孔吸光度值。

计算：
以标准孔活力单位为横坐标，以吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
测定管吸光度减去对照管吸光度后（A测定-A对照），从标准曲线查得AST活力单位。

参考范围：
成年健康人血清AST：8-28卡门单位/ml

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