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β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（简称NAG）广泛存在于各种组织器官、体液、红细胞、白细胞及血小板中，是溶酶体中的一种酸性水解酶。此酶为溶酶体中一种重要的酶，可作为肾损伤一个极为灵敏的指标，由休克引起急生肾功能衰竭的机体尿液中极度增高，最高可达正常情况下的1200倍。急性肾小球肾炎、肾病综合症，毒物或药物引起的肾毒性反应均可使NAG增加。肾移植后，NAG的测定可用来判断有无排斥反应。 贝博® BBcellProbe® β-N-乙酰葡萄糖苷酶检测试剂盒（PNP比色法）（NAG Colorimetric Assay Kit）检测原理是在酸性条件下NAG可使底物对硝基酚-β-N-乙酰氨基葡萄糖苷水解，释放出游离的对硝基酚(p-nitrophenol，PNP)，在碱性条件下p-nitrophenol呈黄色产物，产物黄色越深，说明β-N-乙酰葡萄糖苷酶活性越高，反之则酶活性越低，通过分光光度比色法测定400～410nm处吸光值，据此通过比色分析就可以计算出酶活性水平。 本试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中的β-N-乙酰葡萄糖苷酶活性。 贝博® BBcellProbe® 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以为您提供各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。
2.恒温箱
3.混匀器
4.移液器
2.生理盐水
3.BCA蛋白定量试剂盒
2.吸头
0.6mmol/L对硝基酚标准工作液的配制：
将3mmol/L对硝基酚标准储备液E进行5倍稀释，即3mmol/L标准储备液：纯水=1:4.
底物缓冲液的配制：
底物溶解度小，配制底物溶液时，应先用适量试剂A将试剂B粉剂1支调成糊状，再边搅拌边逐渐加试剂A到30ml，混匀至完全溶解（不可加热）。
【注】：
配好后的底物缓冲液为过饱和溶液，如有结晶，可静置或离心后取上清进行检测。
用不完的底物缓冲液4℃可保存2个月。
操作步骤：
在1.5ml离心管中按下表添加试剂进行反应：
【注】：
37℃反应时可以水浴也可以置培养箱。
充分混匀，2000g离心一分钟，吸取200ul上清液体加入96孔板。
用纯水调零，波长400nm处测定各孔的吸光度值。
计算：
1. 酶活力单位定义：
每升样品与底物在37℃作用1分钟，水解产生1umol对硝基酚为1个酶活力单位。
2. 计算公式：
NAG活力 = 测定孔OD值-对照孔OD值 x 标准品浓度 x 1 x 1000
（U/L） 标准孔OD值-空白孔OD值 （0.6mmol/L） 反应时间15min
3. 计算举例：
取血清50ul按操作表进行检测，测得各孔吸光度如下：空白孔为0.003，标准孔为0.436，对照孔为0.148，测定孔为0.432，则计算结果如下：
NAG活力 = 测定孔OD值-对照孔OD值 x 标准品浓度 x 1 x 1000
（U/L） 标准孔OD值-空白孔OD值 （0.6mmol/L） 反应时间15min
= 0.432-0.148 x 0.6 x 1 x 1000 =26.236 U/L
0.436-0.003 15
二、组织样本的NAG活力测定
组织样本的前处理：
准确称取样本的重量，按照重量（g）：体积（ml）=1:9的比例，加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，制成10%匀浆，2500g，离心10分钟，取上清再用生理盐水稀释成1%的匀浆液待测。
操作步骤：
在1.5ml离心管中按下表添加试剂进行反应：
【注】：
37℃反应时可以水浴也可以置培养箱。
充分混匀，2000g离心一分钟，吸取200ul上清液体加入96孔板。
用纯水调零，波长400nm处测定各孔的吸光度值。
计算：
1. 酶活力单位定义：
每克组织蛋白与底物在37℃作用1分钟，水解产生1umol对硝基酚为1个酶活力单位。
2. 计算公式：
组织NAG活力= 测定孔OD值-对照孔OD值 x 标准品浓度 x 1000 ÷ 1%匀浆蛋白含量
（U/gprot） 标准孔OD值-空白孔OD值 （3mmol/L） 反应时间15min （gprot/L）
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