2-8℃ 避光

开盖后组份按要求条件保存。

6个月

微孔板，酶标仪

液体，细胞，组织

微孔板，酶标仪

1.酶标仪
2.恒温水浴锅
3.离心机
4.移液器

1.纯水
2.蛋白定量试剂盒

1.96孔板
2.吸头
3.一次性手套

1.试剂盒中的低温试剂应避免反复冻融，以免失效或效率下降；
2.组织匀浆液（5X）久置或低温保存，容易产生乳白色浑浊；如果白色浑浊不明显，可以直接使用，不影响效果；如果白色浑浊较多，应弃用；
3.待测样品如不能及时检测，应置于2-8℃保存，3天内稳定；
4.如果样品浓度过高，应用纯水稀释后重新检测，结果乘以稀释倍数；
5.维生素C检测缓冲液现配现用；配好后用不完可4℃避光保存。如果出现出现白色粘稠物，不可使用，需重新配置；

试剂配制
1. 组织匀浆液的稀释：
按组分 B：纯水=1：4的比例稀释，获得1X的组织匀浆液；
2. MPA工作液配制：
取一支1.5gMPA粉末，充分溶解于50ml的组分D中；4℃保存3~4天有效。
【注】：
3. 维生素C检测缓冲液的配制：
取一瓶2.5g试剂E钼酸铵粉末，充分溶解于50ml 纯水中，也可根据使用情况称取一定量的钼酸铵加水按比例溶解即可，4℃避光保存。(最好现配现用)
注意：钼酸铵溶于水会逐渐变化成乳白色浊液，则不能使用。
4. 维生素C标准的配制：
取干净离心管或试管，按下表进行操作，依次稀释：

样本处理
1. 液体样本：直接加样检测
2. 组织/细胞样本
取待测材料，清洗擦干，准确称量5g，加入研磨器内，再加入少量的1x组织匀浆液，研磨碎，留取上清，再次用1x组织匀浆液研磨，最后一并倒入50ml离心管，补充1x组织匀浆液至45ml，充分混匀，4000g离心5min，取0.5ml上清液，加入等量纯水，即为待测样品；

操作步骤：
维生素C的加样：
按照下表设置空白管、标准管、样品管，溶液应按顺序依次加入，并注意避免产生气泡。
如果样品中的维生素C的含量过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
【注】：
 样品的检测最好能设置2平行管，求平均值。

操作表：
立即混匀，30℃水浴15min室，以空白调零，760nm，测各管吸光度值。
计算：
以系列标准维生素C（25、50、75、100、125、150、200、250ug/ml）为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
以样品管的吸光度代入标准曲线方程求得维生素C含量。

100g样品中维生素C含量（mg）= （C0 x V1）X100/（m1 x 1000）
= （C0 x V1）/（m1 x 10）

【注】：
1. C0为根据待测样品的吸光度值在标准曲线上查出的维生素C的浓度（ug/ml）；
2. V1为待测样品的总体积（ml）；
3. m1为样品的质量（g）；
4. 1000：ug换成成mg