2-8℃ 避光

开盖后组份按要求条件保存。

6个月

荧光光度计/酶标仪

固体，液体样本

荧光光度计/酶标仪

1.荧光光度计/酶标仪
2.离心机
3.匀浆器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒

1.纯水
2.稀氢氧化钠

1.离心管或试管
2.吸头
3.一次性手套

1.实验操作中，要严格避免维生素B2受到阳光直射，否则易分解；
2.待测样本如不能及时测定，应置于2-8℃避光保存，3天内稳定；
3.含核黄素的标准品或样品一旦加入还原剂后会因产生二氢化物失去荧光，但而氰化物在空气中又易重新氧化，恢复荧光，因此应在10min内检测完毕，而且越快越好；
4.如果样品浓度过高，应用纯水吸收后再重新测定，结果乘以稀释倍数。

试剂配制：
1. 组织匀浆液的稀释：取适量的试剂B组织匀浆液（10x），用纯水10倍稀释，即组织匀浆液（10x）：纯水=1:9，即得1x组织匀浆液，备用；
2. 稀释标准品：取适量的试剂A维生素B2标准（100ug/ml），按维生素B2标准（100ug/ml）：1x组织匀浆液=1:9稀释成维生素B2标准（10ug/ml），4℃保存。
【注】：
 维生素B2标准（100ug/ml）需要充分溶解混匀，否则会导致标准值不准确；
3. 制备还原剂工作液：取一支试剂C还原剂100mg粉末，充分溶解于2ml蒸馏水，即配制成50mg/ml的还原剂工作液，现配现用；

样本的准备：
固体样品：
取待测材料如青菜、水果、松针等，清洗擦干，准确称量5g置于研磨器内研磨，加入少量1x组织匀浆液，研磨碎，留取上清，再用1x组织匀浆液研磨；最后一并倒入50ml离心管，补充1x组织匀浆液至50ml，用氢氧化钠或盐酸调节pH值至4.5（若无条件，可用pH试纸粗略测定），充分混匀后4000g离心5min或者过滤，上清或滤液定容至50ml，滤液4℃保存备用；

液体样品：
牛奶、饮料等液体样本，取10ml牛奶于100ml烧杯中，加入0.1mol/L的稀盐酸50ml，放入灭菌锅中处理30min，冷却后用稀氢氧化钠调pH至6，再用稀盐酸调pH至4.5，沉淀杂质，过滤后将滤液转移至100ml容量瓶中定容，滤液4℃保存备用；

维生素B2的检测：
选用恰当的滤色片，测定的激发波长为460nm，发射波长为520nm。提前预热仪器30min，蒸馏水调零，以下表6号管的维生素B2标准（2.5ug/ml）作为参比溶液调荧光光度计的荧光强度读数满刻度（100%），分别测定其他标准溶液和待测样本的相对荧光强度，如果荧光强度大于100%，需要稀释后再行测定。分别测定加入还原剂工作液前后的荧光值，记为F0和FT。加入还原剂后，应充分混匀，及时检测；

计算：
溶液的荧光强度校准值：F=F0-FT
公式中：
F为校正后的荧光强度；
F0为还原前荧光强度；
FT为还原后荧光强度；

以各管维生素B2标准的浓度（ug/ml）或含量（ug）为横坐标，以对应的校正后的荧光强度（F）为纵坐标，做出维生素B2标准曲线；

根据维生素B2标准曲线及样品管的校正后的荧光强度（F）即可计算出待测样本中维生素B2的实际浓度和含量；
100ml液体样品中维生素B2含量（ug/100ml）= C x V2 x 100/ V1
100g固体样品中维生素B2含量（ug/100g）= C x V3 x 100/ m
公式中：
C为待测样品中维生素B2的浓度（ug/ml）；
V1为检测体系中加入的滤液体积（ml），5；
V2为液体样本滤液的总体积（ml），100；
V3为固体样本的上清液总体积（ml），50；
m为固体样本的质量（g），5.