铜是人体重要的微量元素,是酶的重要组成部分如铜蓝蛋白(亚铁氧化酶)、超氧化物歧化酶、细胞色素氧化酶等,总含量约为90mg,有90~95%的铜与球蛋白结合,形成铜蓝蛋白;5~10%的铜与清蛋白结合,清蛋白可作为血浆铜的载体,铜的检测方法有分光光度计、原子吸收光谱法、中子活化分析法等。 贝博®血清铜检测试剂盒(Cuprizone微板法)检测原理是在酸性介质中与白蛋白结合的铜从白蛋白中解离出来,经沉淀蛋白质后,铜离子与Cuprizone络合,形成稳定的蓝色络合物,通过酶标仪测定620nm处吸光度,形成的蓝色与血清、血浆铜成线性关系,与标准品比较,根据公式计算出铜含量,该检测试剂盒在62.8μmol/L以下线性关系良好,特异性高,较为灵敏。 本试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对细胞膜、核、胞质、线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、外泌体等细胞不同部位的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对下游实验不同应用的试剂盒,例如用于Western Blotting和双向电泳等不同下游应用的试剂盒;含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒;专用于蛋白质谱检测、Pull-down实验的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒供选择使用。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体、外泌体等不同细胞器的提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供蛋白浓缩、脱盐、沉淀、透析、定量、电泳、纯化、检测等不同蛋白样品处理检测等相关试剂盒。
2.离心机
2.吸头
3.一次性手套
2.如果样品浓度过高,应用去离子水稀释后重新测定,结果乘以稀释倍数;
3.实验过程中用到的水,不可用普通的蒸馏水,尽量采用高纯度的去离子水;
4.玻璃器材尽量用10%的盐酸浸泡24h,取出后用去离子水冲洗后才可以使用;
5.试验中仪器、试管、注射器等尽量避免铜污染;
6.测定波长可选600~640nm,检测结果差异不大;
7.本试剂盒呈色稳定,显色后在4~20℃可稳定1h;
8.随着时间的延长,颜色会变浅或消失,应在1h检测完毕;
9.铜检测缓冲液应密闭保存,用完立即盖紧盖子,防止有效成分的挥发;
血清、血浆按常规方法制备,直接用于本试剂盒的检测,-20℃冻存,用于铜的检测。
铜标准工作液的配制:
取适量的铜标准(100ug/ml),按铜标准(100ug/ml):铜标准稀释液=1:24的比例配制铜标准(4ug/ml),即为铜标准工作液。2~8℃避光保存,3个月有效。
铜的检测:
(一)加样:
最好选用经稀盐酸处理及去离子水清洁的干燥试管或者一次性无菌聚乙烯1.5ml离心管,以及洁净96孔板,如果无法达到上述要求,应尽量避免使用铜污染的器皿,按下表操作:
(二)铜检测
混匀,室温静置20min,以空白调零,酶标仪620nm处测定标准孔和样品孔的吸光度,分别记为A标准,A样品。
计算:
血清、血浆铜(umol/L)=(A样品/A标准)x 62.8
式中:
A样品为样品孔的吸光度;
A标准为标准孔的吸光度。
铜标准(4ug/ml)=铜标准(62.8umol/L)
ug/dl=umol/L/0.157
参考区间:
成年健康人血清铜:
男性:10.99~21.98umol/L (70~140ug/dl)
女性:12.56~23.55umol/L (80~150ug/dl)
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