血清中的无机磷(Inorganic phosphorous)主要由H2PO4-和HPO42-两种磷酸根阴离子组成,上述阴离子在在不同的pH环境下能快速相互转换,在pH7.4血清中两种磷酸根阴离子浓度比例为1:4;在酸中毒环境下二者浓度约为1:1;在碱中毒环境下二者浓度比例为1:9;在pH4.5尿液中浓度比例为100:1。WHO推荐的常规检测方法为比色法,我国卫生部临检中心推荐的常规方法为硫酸亚铁钼蓝比色法和米吐尔钼蓝比色法,亦可采用紫外分光光度法。 贝博®血清无机磷检测试剂盒(紫外分光光度微板法)无需处理样本,利用无机磷与钼酸铵结合生成磷钼酸铵,通过酶标仪检测325-340nm处的吸光度,根据公式计算出无机磷含量。 紫外分光光度法优点在于:操作简便、快速、稳定;缺点在于:易受溶血、黄疸、脂血的干扰。 本试剂盒仅用于科研领域,不可用于临床诊断或其他用途。 贝博® BBcellProbe® 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以为您提供各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品,以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。
2.离心机
2.吸头
3.一次性手套
2.黄疸和脂血样本应做标本空白;
3.本法应在5min-2h内检测,3h后标准孔吸光度无变化,样品孔吸光度随着时间的延长而上升;
4.本法也可以用于自动生化分析仪终点检测法;
5.如果样品浓度过高,可以用蒸馏水稀释后再检测,结果乘以稀释倍数即可。
6.本法线性范围为0.33-3.88mmol/L。
血清、血浆样本: 按常规方法制备,可以直接用于本试剂盒的测定,-20℃冻存。
二、试剂的配制
1.磷标准工作液的配制:
取适量的试剂A磷标准液(1mg/ml),按试剂A:试剂B磷标准稀释液=1:24的比例稀释,即为磷标准工作液(1.292mmol/L),2-8℃保存;
2.无机磷显色工作液的配制:
取适量的试剂C磷检测缓冲液和试剂D钼酸铵显色液,等量混合即为无机磷显色工作液,现配现用,24h内使用完;
三、无机磷加样:
按照下表设置空白孔、标准孔、样品孔,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免气泡的产生。如果样品中的无机磷浓度过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测最好能设置2平行孔,求平均值。
四、磷测定
混匀,37℃孵育10min,以空白孔调零,酶标仪测定标准孔、样品孔325-340nm处吸光度(即为A标准、A样品)。
五、计算
血清、血浆中无机磷(mmol/L)=(A样品/A标准)X 1.292
式中:A样品为样品孔的吸光度;
A标准为标准孔的吸光度;
单位换算:mg/dl=mmol/L/0.323
参考区间:
健康成人血清磷浓度:0.9-1.34mmol/L (2.76-4.16mg/dl)
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