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产品概述
product description
贝博® 钙检测试剂盒（甲基麝香草酚蓝微板法）是利用液体中钙离子在碱性条件下能与甲基麝香草酚蓝（MTB）结合，生成蓝紫色的复合物，加入镁离子螯合剂，去除镁离子背景干扰，通过酶标仪检测610nm处的吸光度，根据公式计算出总钙含量。 钙(Calcium)是一种金属元素，常温下呈银白色晶体，动物的骨骼、蛤壳、蛋壳都含有碳酸钙。检测生命体钙含量，主要通过检测钙离子浓度实现的，用分光度法检测钙较为常见，该法需要合适的金属指示剂或选择性结合钙离子后引起变色的染料化合物，目前较为常用的染料有邻-甲酚 酞络合铜(OCPC)、偶氮砷Ⅲ、甲基麝香草酚蓝等。 本试剂盒仅用于科研领域，不可用于临床诊断或其他用途。 贝博® BBcellProbe® 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以为您提供各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。
保存温度
2-8℃ 避光
注意事项
开盖后组份按要求条件保存。
有效期
一年
检测方法
酶标仪
适用样本
细胞、组织
产品应用
酶标仪
仪器准备
1.酶标仪
2.移液器
3.冰箱
4.冰盒
2.移液器
3.冰箱
4.冰盒
试剂准备
1.PBS 缓冲液
2.生理盐水
3.蛋白定量试剂盒
2.生理盐水
3.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.96孔板
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.在本试剂盒条件下，建议待测样品中钙离子浓度应大于0.5mmol/L为宜，否则有可能造成检测误差；
2.如果样品浓度过高，可以用蒸馏水稀释后再检测，结果乘以稀释倍数即可。
2.如果样品浓度过高，可以用蒸馏水稀释后再检测，结果乘以稀释倍数即可。
使用方法
一、 样本制备：
细胞样本：
1. 取适量的细胞(一般推荐>106以上)，1000g，离心10分钟，弃上清，留细胞沉淀。
2. 用PBS或生理盐水清洗1~2次，1000g，离心10分钟，弃上清，留细胞沉淀。
3. 在100mg细胞沉淀中加入0.9ml 匀浆液E，冰浴条件下匀浆，2500g，离心10分钟，取上清待用。
【注】：
取部分上清测定蛋白含量。
组织样本：
准确称取适量组织样本，按质量(g)：体积(ml)=1：9的比例（建议称取约0.1g 组织，加入0.9ml 匀浆液E），加入9倍体积的匀浆液，冰浴条件下手动或机械匀浆。2500g，离心10分钟，取上清待用。
【注】：
取部分上清测定蛋白含量。
二、 钙显色工作液的配制：
临用前，取试剂B钙检测缓冲液和试剂C：MTB显色液等量混合，即为钙显色工作液，现用现配，2-8℃避光保存，不宜久置；
三、 钙加样：
选用经稀盐酸处理及去离子水清洁的96孔板，按照下表设置空白孔、标准孔、样品孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免气泡的产生。如果样品中的钙离子含量过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测最好能设置平行孔。
四、 钙测定
混匀，室温静置10min，以空白孔调零，酶标仪测定标准孔、样品孔610nm处吸光度（即为A标准、A样品）。
五、 计算
细胞/组织样本中钙（mmol/gprot）
=｛(样本孔吸光度-空白孔吸光度)/(标准孔吸光度-空白孔吸光度)｝×标准品浓度（5mmol/L）÷待测样本浓度(gprot/L)
=（A样品/A标准）X 5÷匀浆液蛋白浓度(gprot/L)
式中：A样品为样品孔的吸光度；
A标准为标准孔的吸光度；
细胞样本：
1. 取适量的细胞(一般推荐>106以上)，1000g，离心10分钟，弃上清，留细胞沉淀。
2. 用PBS或生理盐水清洗1~2次，1000g，离心10分钟，弃上清，留细胞沉淀。
3. 在100mg细胞沉淀中加入0.9ml 匀浆液E，冰浴条件下匀浆，2500g，离心10分钟，取上清待用。
【注】：
取部分上清测定蛋白含量。
组织样本：
准确称取适量组织样本，按质量(g)：体积(ml)=1：9的比例（建议称取约0.1g 组织，加入0.9ml 匀浆液E），加入9倍体积的匀浆液，冰浴条件下手动或机械匀浆。2500g，离心10分钟，取上清待用。
【注】：
取部分上清测定蛋白含量。
二、 钙显色工作液的配制：
临用前，取试剂B钙检测缓冲液和试剂C：MTB显色液等量混合，即为钙显色工作液，现用现配，2-8℃避光保存，不宜久置；
三、 钙加样：
选用经稀盐酸处理及去离子水清洁的96孔板，按照下表设置空白孔、标准孔、样品孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免气泡的产生。如果样品中的钙离子含量过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测最好能设置平行孔。
四、 钙测定
混匀，室温静置10min，以空白孔调零，酶标仪测定标准孔、样品孔610nm处吸光度（即为A标准、A样品）。
五、 计算
细胞/组织样本中钙（mmol/gprot）
=｛(样本孔吸光度-空白孔吸光度)/(标准孔吸光度-空白孔吸光度)｝×标准品浓度（5mmol/L）÷待测样本浓度(gprot/L)
=（A样品/A标准）X 5÷匀浆液蛋白浓度(gprot/L)
式中：A样品为样品孔的吸光度；
A标准为标准孔的吸光度；
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