铁是人体必需微量元素,总含量约为3270mg,铁分布较广,有67.6%的铁作为血红蛋白分子的辅基分布于血红蛋白中,参与铁的运输;骨骼和肌红蛋白中各存在2.59%和4.15%,储存铁约占25.37%血清中铁均以三价铁离子形式与转铁蛋白结合,因此测定血清铁时,首先需要Fe3+与转铁蛋白分离。 贝博® 铁(Urea)检测试剂盒(亚铁嗪法)是采用分光光度法以亚铁嗪为底物进行铁的检测,在酸性介质中与转铁蛋白结合的血清铁从转铁蛋白中解离出来,其他样品中的铁在酸性介质环境下也会被解离,再被还原剂还原为Fe2+,后者与亚铁嗪生成紫红色化合物,通过酶标仪检测562nm处吸光度,适用于检测血清、血浆样品中的铁含量。 上述检测方法为直接法,应设血清空白,纠正血清本身的色度,根据公式计算出铁含量,该检测试剂盒在140umol/L以下线性关系良好,甘油三酯≤3.39mmol/L,胆红素≤171umol/L,对本法基本无干扰。 本试剂盒仅用于科研领域,不可用于临床诊断或其他用途。 贝博® BBcellProbe® 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以为您提供各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品,以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。
2.移液器
3.冰箱
4.冰盒
2.吸头
3.一次性手套
2.如果样品浓度过高,应用双蒸水稀释后测定,结果乘以稀释倍数;
3.实验过程中,尽量采用高纯度的去离子水,不可用普通的蒸馏水;
4.玻璃器材需要10%盐酸浸泡24h,取出后用去离子水冲洗后才可以使用;
5.避免与铁器接触,以防铁污染;
6.标准品呈色24h稳定,血清呈色30min内稳定,随着时间的延长,颜色会慢慢加深,应在1h内比色完毕;
7.0.97为体积校正值。
8.该法批内差异CV≤3.1% ;批间差异≤2.6%.
血清、血浆样本: 按常规方法制备,可以直接用于本试剂盒的测定,-20℃冻存;
二、试剂的配制
铁标准品工作液的配制:
取适量的铁标准(100ug/ml),按铁标准(100ug/ml):铁标准稀释液=1:49的比例混合,,即为铁标准品工作液(2ug/ml)。2-8℃保存,三个月有效。
三、铁加样:
选用经稀盐酸处理及去离子水清洁的96孔板,按照下表设置空白孔、标准孔、样品孔,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免气泡的产生。
如果样品中的铁离子浓度过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定,样品的检测最好设置平行孔。
四、铁测定
充分混匀,室温静置15min或37℃孵育10min,以空白孔调零,酶标仪测定标准管、样品管562nm处吸光度(即为A标准、A样品)。
五、计算
血清/血浆铁(umol/L)=(A样品- A血清空白x 0.97)÷A标准x 35.8
式中:A样品为测定孔加入亚铁嗪显色液后测定的吸光度;
A血清空白为测定孔未加入亚铁嗪显色液前测定的吸光度;
A标准为标准孔的吸光度;
0.97为体积校正值。
单位换算:铁标准(2ug/ml)=铁标准(35.8umol/L)
ug/dl=umol/L/0.179
参考区间:
成年健康人血清铁:男性 11-30 umol/L (60-170 ug/dl);
女性 9-27 umol/L (50-150 ug/dl);
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