2-8℃ 避光

1.试剂C避免反复冻融，试剂拆封后请尽快使用完！

6个月

分光光度计

细胞/组织/血清血浆/尿液

分光光度计

1.分光光度计
2.水浴锅
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒

1.纯水

1.离心管
2.吸头
3.一次性手套

1.血清或肝素抗凝血浆检测效果较好；草酸类、EDTA抗凝剂对LDH活性有抑制作用；
2.避免使用溶血样本；
3.提取出来的血清样本不宜冰箱放置，应室温放置3天有效；
4.处理后的样品应及时检测，否则易失效；
5.比色应在3-10min内完成，否则吸光度值会下降。

样品准备：
1. 血浆、血清样品：
血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，室温保存3天，用于LDH的检测；
2. 细胞或组织样品：
取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，室温保存3天，用于LDH的检测。
3. 长期保存样品：
如果提取后的样品无法及时检测，需要放置时间较长，按下列方法操作：取LDH保护剂1支，加入1.0ml的LDH保护稀释液，配制成LDH保护工作液，-20℃避光保存。按待测样品(如血清)：LDH保护工作液=9:1的比例混合，4℃避光保存。
4. (选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的LDH含量。

制作标准曲线：
用试剂B（LDH 检测缓冲液）准确稀释试剂A（丙酮酸标准（5mmol/L））至0.5 mmol/L，按下表制备标准曲线。

碱性显色工作液的配制：
取适量的碱性显色液，按碱性显色液：纯水=2:3的比例混合，即为碱性显色工作液。

LDH酶促反应：
按照下表设置对照管、标准管、样品管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。

LDH检测：
充分混匀，室温放置5min。用分光光度计测定，用纯水调零，比色杯1.0cm光径，测定各管的440nm吸光度。记为A空白、A标准、A对照、A测定

活力单位定义及计算：
LDH活性蛋白的定义：
在37℃，100ml血清中LDH 15min催化底物产生1umol丙酮酸为一个LDH金氏酶活力单位。根据酶活性定义，计算出样品中的LDH活性。

以标准管酶活力单位为横坐标，以吸光度（A标准-A空白）为纵坐标，绘制标准曲线。
用样品管与对照管吸光度值之差（A样品-A对照）在标准曲线上查出待测样品的LDH酶活力单位。

A空白为空白管的吸光度；
A标准为标准管的吸光度；
A样品为样品管的吸光度；
A对照为对照管的吸光度；
【注】：
 如果待测样品加入LDH保护工作液，其结果应除以0.9。