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产品概述
product description
葡糖-6-磷酸脱氢酶( glucose 6-phosphatedehydrogenase，G-6-PD或G6PD)是糖酵解途径、柠檬酸循环以外的另一个葡萄糖分解途径的磷酸葡萄糖酸途径(磷酸戊糖途径)中的第一个酶(EC1.1.1.49)。 贝博®葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)其检测原理是红细胞G-6-PD催化葡萄糖-6-磷酸(G-6-D)生成葡萄糖-6-磷酸葡萄糖-δ-内脂，后者很快氧化成6-磷酸葡萄糖酸(6-PGA)，同时NAPD被还原成NADPH，其反应公式如下：G-6-P+NAPD+→6-PGA+L-NADPH。在上述偶联反应中NADPH生成速率与样本中酶活性呈正比，通过酶标仪或自动分析仪在340nm处检测吸光度升高速率(ΔA/min)，升高速率(ΔA/min)与G-6-PD活性呈正比，直接计算酶的活性单位。100T该试剂盒试剂可以检测50次样本。 该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对细胞膜、核、胞质、线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、外泌体等细胞不同部位的蛋白提取试剂盒。
保存温度
2-8℃ 避光
注意事项
开盖后组份按要求条件保存。
有效期
6个月
检测方法
微孔板，酶标仪
适用样本
红细胞
产品应用
微孔板，酶标仪
仪器准备
1.酶标仪
2.水浴锅或恒温箱
2.水浴锅或恒温箱
试剂准备
1.生理盐水
耗材准备
1.一次性手套
2.96孔板
2.96孔板
使用注意事项
1.红细胞比容又称红细胞压积，指红细胞占全血容积的百分比，反映红细胞和血浆的比例。
2.红细胞比容正常值:37~50%，女低于男；生理意义是影响血黏度(带氧能力)的主要因素。
3.血清中G6PD活性在室温可以保存2天，4℃保存1周，-20℃保存1个月。但贝博建议4℃保存10h，-20℃保存48h，以免活性下降。
4.本试剂盒不提供Hb的测定试剂，需客户单独购买。
5.严重黄疸、脂血或溶血的血清，可能会引起测定管吸光度增高。
2.红细胞比容正常值:37~50%，女低于男；生理意义是影响血黏度(带氧能力)的主要因素。
3.血清中G6PD活性在室温可以保存2天，4℃保存1周，-20℃保存1个月。但贝博建议4℃保存10h，-20℃保存48h，以免活性下降。
4.本试剂盒不提供Hb的测定试剂，需客户单独购买。
5.严重黄疸、脂血或溶血的血清，可能会引起测定管吸光度增高。
使用方法
一、试剂的准备：
1、溶血液的制备：
取新鲜抗凝血，3000g离心30min，可见血液各成分按重力不同而分层，上层淡黄色液体是血浆，下层不透明的暗红色血栓为红细胞，红细胞与血浆之间的一薄层白膜是白细胞和血小板，弃上清及白细胞层，用4℃预冷的生理盐水洗涤2次，每次取上清时，务必去除剩余的白细胞层，再加预冷的生理盐水配成含红细胞压积为30%的红细胞悬液，4℃保存10h，-20℃保存48h。临用前，以样本稀释液稀释20~25倍，即为溶血液。
2、 配制NADP储备液：
取9mg NADP溶解于1ml G6PD 检测缓冲液，充分混匀，配制成NADP储备液(9mg/ml)，-20℃保存备用。
3、 配制检测工作液：
取NADP储备液和G6PD 检测缓冲液，按NADP储备液(9mg/ml)：G6PD 检测缓冲液=1：49的比例混合，即为检测工作液。-20℃保存1个月有效。
4、 配制G-6-P工作液：
取G-6-P 1支溶解于G-6-P稀释液10ml即为G-6-P工作液，分装成小份后，-20℃保存备用。
二、酶标仪检测：
按照下表设置空白孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。对于量程比较大的比色杯，其加样量应相应增多，检测样本量则对应减少； 对于量程比较小的比色杯，其加样量应相应减少，检测样本量则对应增加。
三、生化分析仪检测：
按照下表设置主要参数。如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
四、计算：
分光光度计计算公式：
G6PD(U/L)=ΔA/min×(106/6220)×(1000/20)=ΔA/min×8040
G6PD(U/g Hb)= ΔA/min×8040/Hb
式中：
6220=NADH的吸光度
1000=反应液的总体积(μl)
20=待测样品体积(μl)
Hb=血红蛋白含量(g/L溶血液)
生化分析仪计算公式：
G6PD(U/L)=ΔA/min×(106/6220)×(303/6)=ΔA/min×8040
G6PD(U/g Hb)= ΔA/min×8040/Hb(g/L溶血液)
式中：
ΔA/min=测定的340nm吸光度的升高速率
6220=NADH的吸光度
303=反应液的总体积(μl)
6=待测样品体积(μl)
Hb=血红蛋白含量(g/L溶血液)
参考范围：成年健康人红细胞G6PD：8~18U/g Hb 1300~3600 U/L
1、溶血液的制备：
取新鲜抗凝血，3000g离心30min，可见血液各成分按重力不同而分层，上层淡黄色液体是血浆，下层不透明的暗红色血栓为红细胞，红细胞与血浆之间的一薄层白膜是白细胞和血小板，弃上清及白细胞层，用4℃预冷的生理盐水洗涤2次，每次取上清时，务必去除剩余的白细胞层，再加预冷的生理盐水配成含红细胞压积为30%的红细胞悬液，4℃保存10h，-20℃保存48h。临用前，以样本稀释液稀释20~25倍，即为溶血液。
2、 配制NADP储备液：
取9mg NADP溶解于1ml G6PD 检测缓冲液，充分混匀，配制成NADP储备液(9mg/ml)，-20℃保存备用。
3、 配制检测工作液：
取NADP储备液和G6PD 检测缓冲液，按NADP储备液(9mg/ml)：G6PD 检测缓冲液=1：49的比例混合，即为检测工作液。-20℃保存1个月有效。
4、 配制G-6-P工作液：
取G-6-P 1支溶解于G-6-P稀释液10ml即为G-6-P工作液，分装成小份后，-20℃保存备用。
二、酶标仪检测：
按照下表设置空白孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。对于量程比较大的比色杯，其加样量应相应增多，检测样本量则对应减少； 对于量程比较小的比色杯，其加样量应相应减少，检测样本量则对应增加。
三、生化分析仪检测：
按照下表设置主要参数。如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
四、计算：
分光光度计计算公式：
G6PD(U/L)=ΔA/min×(106/6220)×(1000/20)=ΔA/min×8040
G6PD(U/g Hb)= ΔA/min×8040/Hb
式中：
6220=NADH的吸光度
1000=反应液的总体积(μl)
20=待测样品体积(μl)
Hb=血红蛋白含量(g/L溶血液)
生化分析仪计算公式：
G6PD(U/L)=ΔA/min×(106/6220)×(303/6)=ΔA/min×8040
G6PD(U/g Hb)= ΔA/min×8040/Hb(g/L溶血液)
式中：
ΔA/min=测定的340nm吸光度的升高速率
6220=NADH的吸光度
303=反应液的总体积(μl)
6=待测样品体积(μl)
Hb=血红蛋白含量(g/L溶血液)
参考范围：成年健康人红细胞G6PD：8~18U/g Hb 1300~3600 U/L
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