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产品概述
product description
碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase，简称ALP或AKP)是广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织经肝脏向胆外排出的一种酶。这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团，从而使DNA或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端。 贝博TM BBcellProbe® 碱性磷酸酶检测试剂盒(磷酸苯二钠法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用磷酸苯二钠比色法，其检测原理是磷酸苯二钠在碱性条件下，可在碱性磷酸酶的作用下生成游离酚和磷酸，通过酶标仪测定510nm处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出碱性磷酸酶活性水平。 本试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清等样品中内源性的碱性磷酸酯酶活性。 贝博TM BBcellProbe® 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 贝博TM BBcellProbe® 可以为您提供各种颜色的BBcellProbeTM M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。
保存温度
2-8℃ 避光
注意事项
开盖后组份按要求条件保存。
有效期
6个月
检测方法
分光光度计
适用样本
血清血浆/组织/细胞
产品应用
分光光度计
仪器准备
1.可见分光光度计
2.恒温水浴锅
3.离心机
4.漩涡混匀器
5.移液器
2.恒温水浴锅
3.离心机
4.漩涡混匀器
5.移液器
试剂准备
1.纯水
耗材准备
1.离心管
2.吸头
2.吸头
使用注意事项
1.待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂。
2.样品避免反复冻融。
3.如果没有分光光度计，也可以使用酶标仪测定。
4.所测样本的值高于标准曲线的上限，应稀释样品后重新测定。
5.空白管如果显红色，说明ALP显色液不可用，应丢弃。
6.加入显色基液时，应迅速，并且及时混匀，否则显色不充分。
2.样品避免反复冻融。
3.如果没有分光光度计，也可以使用酶标仪测定。
4.所测样本的值高于标准曲线的上限，应稀释样品后重新测定。
5.空白管如果显红色，说明ALP显色液不可用，应丢弃。
6.加入显色基液时，应迅速，并且及时混匀，否则显色不充分。
使用方法
样品测定：
1. 配制标准品工作液
取出试剂D：标准品1mg/ml恢复至室温后，取0.1ml溶解于1.9ml的试剂E：ddH2O中，使浓度为0.05mg/ml，即为标准品工作液。
参照下表稀释系列标准品溶液
2. 样品准备：
1) 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要需适当匀浆；低速离心取上清，-80℃冻存，用于碱性磷酸脂酶的检测；
2) 血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定；尿液通常也可以直接用于测定，-80℃冻存，但为了消除样品本身颜色的干扰，需设置加了血浆或血清但不加底物的对照；
3) 高活性样品：如果样品中含有较高活性的碱性磷酸酶，可以使用原有的裂解液或PBS等进行稀释，如鸡血清、血浆可稀释5~10倍后检测。
3. 加样：
依照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免气泡的产生。如果样品中的碱性磷酸酯酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再测定。样品的检测最好能设置平行管。
立即混匀，510nm，0号管（ddH2O）调零，测各管吸光度。
计算公式：
碱性磷酸酶金氏活性单位的定义：
在37℃条件下，100ml待测样品与显色底物（即ALP显色液所含物质）作用15分钟，产生1mg酚为一个金氏单位。
以系列标准品工作液（1~5号管）对应的金氏单位为X轴，以相应的标准管吸光度（1~5号管）为Y轴，绘制标准曲线。
以测定管与空白管的吸光度值的差额为实际的吸光度，用该差值与标准曲线进行对比，算出酶活力单位。
1. 配制标准品工作液
取出试剂D：标准品1mg/ml恢复至室温后，取0.1ml溶解于1.9ml的试剂E：ddH2O中，使浓度为0.05mg/ml，即为标准品工作液。
参照下表稀释系列标准品溶液
2. 样品准备：
1) 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要需适当匀浆；低速离心取上清，-80℃冻存，用于碱性磷酸脂酶的检测；
2) 血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定；尿液通常也可以直接用于测定，-80℃冻存，但为了消除样品本身颜色的干扰，需设置加了血浆或血清但不加底物的对照；
3) 高活性样品：如果样品中含有较高活性的碱性磷酸酶，可以使用原有的裂解液或PBS等进行稀释，如鸡血清、血浆可稀释5~10倍后检测。
3. 加样：
依照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免气泡的产生。如果样品中的碱性磷酸酯酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再测定。样品的检测最好能设置平行管。
立即混匀，510nm，0号管（ddH2O）调零，测各管吸光度。
计算公式：
碱性磷酸酶金氏活性单位的定义：
在37℃条件下，100ml待测样品与显色底物（即ALP显色液所含物质）作用15分钟，产生1mg酚为一个金氏单位。
以系列标准品工作液（1~5号管）对应的金氏单位为X轴，以相应的标准管吸光度（1~5号管）为Y轴，绘制标准曲线。
以测定管与空白管的吸光度值的差额为实际的吸光度，用该差值与标准曲线进行对比，算出酶活力单位。
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