2-8℃ 避光

开盖后组份按要求条件保存。

6个月

微孔板，酶标仪

血清血浆/全血/组织

微孔板，酶标仪

1.酶标仪
2.离心机

1.双蒸水

1.一次性手套
2.吸头

1.血液中的GSH几乎全部存在于红细胞内，可以用每升全血中GSH的克数来表示，也可用每克Hb中GSH含量来表示；
2.计算时应用消光系数，故比色计要校正波长。用标准管计算较方便、准确；
3.吸取上清时，最好用带刻度的5ml滴管，或者移液器，避开表面的一层薄膜，插到上清液中吸取2ml做显色反应；
4.最好每批实验做2个标准管、空白管，以减少操作误差；

试剂工作液配制 ：
1. 试剂A为过饱和溶液，如有结晶，则取上清使用；

2. GSH标准溶剂工作液：
溶剂储备液：双蒸水=1：9稀释，即为GSH标准溶剂工作液，现用现配。

3. 1mmol/LGSH标准溶液的配制：GSH分子量为307，每次测定前将3.07 mg的GSH标准品加到10mlGSH的溶剂工作液中，混匀，现用现配。

4. 20μmol/LGSH标准溶液的配制:取1mmol/LGSH标准溶液0.2ml加GSH标准溶剂工作液9.8ml，现用现配。

样本的前处理：
1. 培养细胞：将收集好的细胞，用PBS清洗1~2次，低速离心收集沉淀细胞，再加入0.3-0.5ml 0.1M pH7.4的等渗PBS缓冲液重悬细胞，超声或手动研磨破碎细胞后待测；
上清液制备：
取破碎后的细胞悬液0.1ml,加0.1ml试剂A混匀，3500转/分离心10分钟， 取上清液1ml待测；

2. 血清（浆）：取0.05ml,加试剂A0. 2ml混匀，3500转/分离心10分钟， 取上清液待测；

3. 全血样本的处理：1:9溶血液的制备：取0.1ml肝素抗凝全血加双蒸水0.9ml，充分混匀，直至透亮为止；
上清液制备：取0.05ml,加试剂A0. 2ml混匀，3500转/分离心10分钟， 取上清液待测；

4. 组织样本：10%匀浆液的制备：准确称取组织重量，按重量（g）：体积（ml）=1:9比例加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，2500转/分，离心10min，取上清液待测；
上清液制备：取0.1ml,加0. 1ml试剂A 0. 1ml混匀，3500转/分离心10分钟， 取上清液待测；


计算：

（1）全血计算公式：
全血中GSH含量 = 测定OD值 – 空白OD值 x 标准品浓度 x 样本前处理 x 样本测定前
（umol/L） 标准OD值 - 空白OD值 （20umol/L） 稀释倍数（5倍）稀释倍数（10倍）

（2）细胞及组织计算公式：

GSH含量 = 测定OD值 – 空白OD值 x 标准品浓度 x样本前处理 ÷ 待测匀浆蛋白
（umol/gprot） 标准OD值 - 空白OD值 （20umol/L） 稀释倍数（2倍） 浓度（gprot/L）

（3）血清（浆计算公式）

GSH含量 = 测定OD值 – 空白OD值 x 标准品浓度 x样本前处理
（umol/L） 标准OD值 - 空白OD值 （20umol/L） 稀释倍数（5倍）