冰冻切片活性氮(RNS)检测试剂盒-绿色荧光

BB-470577
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产品概述 product description

活性氮(reactive nitrogen species,RNS)是指NO与包括活性氧在内的化合物相互作用,生成一系列包括ONOO•及其质子形式过氧亚硝酸(HOONO)等具有高度氧化活性的自由基和硝基类化合物,这些与活性氧相对应的以NO为中心的衍生物称为活性氮。活性氮主要包括氮氧化物一氧化氮(NO)和二氧化氮(NO2)、过氧化亚硝酰阴离子(ONOO•)、亚硝酰氢(HNO)、亚硝酸根离子(NO2-)和氨等。 贝博® BBoxiProbe® 冰冻切片活性氮检测试剂盒是一种利用荧光探针BBoxiProbe® O52进行活性氮检测的试剂盒。BBoxiProbe® O52是一种细胞膜通透性的荧光探针,被活性氮特异性氧化生成绿色荧光物质,绿色荧光强度与活性氮水平成正比,检测绿色荧光就可以知道组织内活性氮的水平。 在激发波长490 nm,发射波长516 nm附近,使用荧光显微镜/激光共聚焦检测绿色荧光,从而测定样本内活性氮水平。 一般最好使用新鲜样本振动切片或者冰冻切片检测活性氮(RNS)。石蜡切片样本的活性氮在蜡块的制作过程中会损失掉,有条件的话就使用振动切片或者冰冻切片样本,一般不建议使用石蜡切片样本。已经制备好的石蜡切片样本中残余的活性氮也可以用本试剂盒检测。 除了本试剂盒的绿色荧光活性氮检测产品,贝博还可以提供红色荧光的活性氮检测试剂盒。 贝博® BBoxiProbe® 可以提供针对各种类型活性氧、活性氮的检测试剂盒。 贝博® BBcellProbe® 可以提供各种细胞检测试剂盒。包括细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以为您提供各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品,以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。

保存温度
-20℃ 避光
注意事项
1.避免反复冻融。
2.可以根据需要分装后冻存。
3.探针为DMSO溶液,在2-8℃时是固体状态,冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
有效期
6个月
检测方法
1.荧光显微镜2.激光共聚焦
适用样本
切片样本
产品特点
1.使用方便:可用荧光显微镜直接观察;
2.背景低,灵敏度高;
3.线性范围宽,使用方便。

仪器准备
1.激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪,
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
PBS缓冲液或者HBSS
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套

使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。
2.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间,以减少各种可能的误差。
3.对于某些样本,如果荧光太强,可以按照1:200-1:1000稀释探针。探针标记的时间也可以根据情况在20-60分钟内适当进行调整。
4.以下操作步骤仅供参考,请根据实际样本情况调整。

使用方法
一、 试剂配制
1. 根据样本数,用纯水将BBoxiProbe® O52活性氮荧光探针100-200倍稀释,配成染色工作液。
2. 用纯水将10X清洗液10倍稀释,配成1X清洗液工作液。

二、 探针标记
1. 准备待测的厚为10-20 μm的未经固定处理的冰冻切片。
2. 室温下,小心加上200 μl清洗液工作液,铺满整个切片表面,静置3-5分钟。
3. 小心吸除清洗液。
4. 滴加100-200 μl染色工作液,在37℃培养箱避光孵育20-60分钟。
5. 移除染色液。
6. 用PBS洗涤切片2-3次。
7. 加盖玻片或封片。
8. 荧光显微镜检测。
参考文献
1.Gang Zhong, et al.
Dopamine-melanin nanoparticles scavenge reactive oxygen and nitrogen species and activate autophagy for osteoarthritis therapy
Nanoscale 2019 (IF=7.233)

2.Yingjun Zhou, et al.
Respiratory exposure to nano‐TiO2 induces pulmonary toxicity in mice involving reactive free radical‐activated TGF‐β/Smad/p38MAPK/Wnt pathways
Journal of Biomedical Materials Research 2019 (IF=3.525)

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