贝博® BBoxiProbe® 组织切片活性氧检测试剂盒是一种利用荧光探针BBoxiProbe® O12进行活性氧检测的试剂盒。 BBoxiProbe® O12是一种细胞膜通透性的荧光探针,本身没有荧光,被活性氧特异性氧化生成绿色荧光物质,绿色荧光强度与活性氧水平成正比,检测绿色荧光就可以知道组织内活性氧的水平。 在激发波长500nm,发射波长525 nm附近,使用荧光显微镜/激光共聚焦检测绿色荧光,从而测定样本内活性氧水平。利用本试剂盒可以快速定性检测样本内活性氧水平变化差异。 活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括过氧化氢(H2O2,Hydrogen peroxide)、羟基自由基(•OH,Hydroxyl radical)、单线态氧(1O2,Singlet oxygen)、一氧化氮(NO,Nitric oxide)、超氧阴离子(•O2-,Superoxide anion)、过氧化自由基(ROO• ,Peroxyl radical)、过氧羟自由基(HOO• ,hydroperoxyl)及其下游产物过氧化物过氧亚硝基阴离子(ONOO-,Peroxynitrite anion)、ClO-和羟化物等,参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。 活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生主要是氧化磷酸化的结果,在呼吸链中,在某些位点会有“泄露”的电子直接和氧气或和其他电子受体反应,在酶或非酶作用下引发一系列反应生成不同种类的活性氧:“泄露”的电子最初和氧气反应生成超氧阴离子自由基(O2•-)(图1A)。超氧阴离子遇水生成H2O2(图1B),同时过氧化氢也可由氧气在单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)的作用下生成(图1C),生成的过氧化氢在髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)的催化下与Cl-反应可生成ClO-(图1D),在铁或铜离子的催化下发生Fenton反应生成OH•(图1E),超氧阴离子遇氮氧化物反应生成ONOO-(图1F)。这些生成的高氧化活性的物质统称为活性氧。 一般最好使用振动切片或者冰冻切片样本检测活性氧。石蜡切片样本的ROS在蜡块的制作过程中会损失掉,不建议使用石蜡切片样本。已经制备好的石蜡切片样本中残余的ROS本试剂盒也可以检测。 有条件的话也可以采用直接用组织样本检测,不需要制备成切片的ROS检测试剂盒(相关产品:BB-470512)。 除了绿色荧光的ROS检测试剂盒,贝博也可以提供红色、蓝色、深红色等其它颜色的检测试剂盒(相关产品:BB-470522/470523)。 贝博® 还可以为您提供各种组织、细胞样本、切片样本的活性氧、活性氮等各种颜色的检测试剂盒产品。
2.可以根据需要分装后冻存。
3.探针为DMSO溶液,在2-8℃时是固体状态,冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.石蜡切片
2.背景低,灵敏度高;
3.线性范围宽,使用方便。
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
2.吸头
3.玻片
4.一次性手套
2.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间,以减少各种可能的误差。
3.对于某些样本,如果荧光太强,可以按照1:200-1:1000稀释探针。探针标记的时间也可以根据情况在20-60分钟内适当进行调整。
4.冰冻切片制作不需要经过固定脱水包埋等步骤,直接冷冻后切片贴片。
5.有条件也可以采用振动切片的方法。有些方便处理的样品类型也可以采用徒手切片。
6.以下操作步骤仅供参考,请根据实际样本情况调整。
1. 根据样本数,用纯水将BBoxiProbe® O12活性氧荧光探针200倍稀释,配成染色工作液。
2. 用纯水将10X清洗液10倍稀释,配成1X清洗液工作液。
探针标记
1. 准备待测的厚为10 μm的未经固定处理的冰冻切片。
2. 室温下,小心加上200 μl清洗液工作液,铺满整个切片表面,静置5-10分钟。
3. 小心吸除清洗液。
4. 滴加100 μl染色工作液,在37℃培养箱避光孵育20-60分钟。
5. 移除染色液。
6. 用PBS洗涤切片2-3次。
7. 加盖玻片或甘油封片。
8. 荧光显微镜检测。
Combined exposure of fine particulate matter and high-fat diet aggravate the cardiac fibrosis in C57BL/6J mice
Journal of Hazardous Materials 2020 (IF=7.65)
2.Jingyu Song, et al.
Protective effect of Berberine on reproductive function and spermatogenesis in diabetic rats via inhibition of ROS/JAK2/NFκB pathway
Andrology 2020 (IF=3.106)
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