2-8℃避光

开盖后组份按要求条件保存。

3个月

酶标仪

血清、血浆、组织

1. 酶标仪
2. 恒温水浴锅
3. 涡旋混匀器
4. 离心机
5. 移液器
6. 冰箱
7. 冰盒

纯水

1.96孔板
2.吸头
3.一次性手套

1. 测定血清和血浆时，如果样本不溶血，每批样本只需要随机挑选2个样本做空白或者用双蒸水代替样本做空白；如果样本溶血的话，必须每个样本做空白对照。
2. 测定全血时，必须每个样本都设定空白对照；
3. 测定组织匀浆时，如果样本不是高脂，每批样本只需随机挑选2个样本做空白或者用双蒸水代替样本做空白；如果样本高脂的话，必须每个样本做空白对照；
4. 所有实验用水均需使用纯水或双蒸水。
5. 需使用一次性塑料试管，若没有，使用较新的玻璃管并彻底洗刷干净。
6. 试剂D天冷后会凝固，待 37℃水浴变澄清时再使用。

酶液提取： 1. 细胞或组织样品的制备：
（1）培养细胞：
先收集细胞到离心管内，离心后弃上清；
按照细胞数量 （104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
（2）组织：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织， 加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2. 血清（浆）样品：直接检测。

CAT测定：
1. 酶标仪预热30min 以上，检测波长240nm，蒸馏水调零。
2. 测定前将CAT 检测工作液在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min 以上。
3. 准备96 孔UV 板一块。
【注】：
 非普通酶标板，普通酶标板只能透过可见光，不能透过紫外光，检测波长小于340nm 务必使用UV 板。
4. 在96 孔UV 板中加入10μL 待测样本和190μL 工作液，充分混匀，记录240nm下初始吸光值A1 和1min 后的吸光值A2。
5. 计算ΔA＝A1-A2。


CAT活力计算：
1. 血清（浆）中CAT活力计算：
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟催化1nmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。

CAT(nmol/min/mL)=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷V样÷T
=918×ΔA

2. 组织、细胞中 CAT 活力计算：
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化 1nmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。

CAT(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109 ]÷(V样×Cpr) ÷T
=918×ΔA÷Cpr

（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g 组织每分钟催化 1nmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。CAT(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d）×109 ]÷(W×V样÷V样总)÷T
=918×ΔA÷W

（3）按细胞密度计算：
单位的定义：每 1 万个细胞每分钟催化 1nmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。

CAT(nmol/min /104cell)＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109 ]÷（500×V样÷V样总）÷T =1.836×ΔA


【注】：
V反总：反应体系总体积，2×10-4 L；
ε：H2O2摩尔消光系数，4.36×104 L / mol /cm；
d： 96孔板光径，0.5cm；
V样：加入样本体积，0.01 mL；
V样总：加入提取液体积，1 mL；
T： 反应时间，1 min；
W：样本质量，g；
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
500：细胞总数，500 万。