贝博® BBoxiProbe® O11细菌活性氧(ROS)检测试剂盒是一种利用荧光探针BBoxiProbe® O11进行活性氧检测的试剂盒。O11探针可自由透过细菌细胞膜进入细胞内,并被细菌细胞内的ROS氧化,产生绿色荧光物质,并稳定存在于细菌胞内。根据细菌细胞中绿色荧光的强弱,可以判断细菌细胞ROS含量的变化情况。 在激发波长488 nm,发射波长526 nm附近,使用荧光分光光度计、荧光酶标仪、荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪等可以检测荧光强度的设备,可以方便测定荧光强度情况,从而测定细菌胞内活性氧水平。 除了本绿色荧光检测的试剂盒以外,贝博还可以提供红色荧光的检测试剂盒(相关产品:BB-461113)以及细菌培养上清的活性氧检测试剂盒(相关产品:BB-475056)。 活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括过氧化氢(H2O2,Hydrogen peroxide)、羟基自由基(•OH,Hydroxyl radical)、单线态氧(1O2,Singlet oxygen)、一氧化氮(NO,Nitric oxide)、超氧阴离子(•O2-,Superoxide anion)、过氧化自由基(ROO• ,Peroxyl radical)、过氧羟自由基(HOO• ,hydroperoxyl)及其下游产物过氧化物过氧亚硝基阴离子(ONOO-,Peroxynitrite anion)、ClO-和羟化物等,参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。 活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生主要是氧化磷酸化的结果,在呼吸链中,在某些位点会有“泄露”的电子直接和氧气或和其他电子受体反应,在酶或非酶作用下引发一系列反应生成不同种类的活性氧:“泄露”的电子最初和氧气反应生成超氧阴离子自由基(O2•-)(图1A)。超氧阴离子遇水生成H2O2(图1B),同时过氧化氢也可由氧气在单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)的作用下生成(图1C),生成的过氧化氢在髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)的催化下与Cl-反应可生成ClO-(图1D),在铁或铜离子的催化下发生Fenton反应生成OH•(图1E),超氧阴离子遇氮氧化物反应生成ONOO-(图1F)。这些生成的高氧化活性的物质统称为活性氧。 贝博® BBoxiProbe® 可以为您提供各种细胞样本、切片样本、组织样本的活性氧、活性氮检测试剂盒产品。 贝博® BBoxiProbe® 可以为您提供总活性氧、总活性氮和各种亚型的活性氧/活性氮的检测试剂盒产品。 贝博® BBoxiProbe® 可以为您提供各种绿色、红色、蓝色、深红色的活性氧/活性氮检测试剂盒产品。
2.可以根据需要分装后冻存。
3.探针为DMSO溶液,在2-8℃时是固体状态,冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
2.背景低,灵敏度高;
3.线性范围宽,使用方便。
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
2.吸头
3.一次性手套
4.黑色96孔板
2.荧光探针标记后,一定要洗净残余的未进入细胞内的探针,否则会导致背景较高。
3.探针标记完毕并洗净残余探针后,可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描,以确认探针的标记情况是否正常。
4.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间,以减少各种可能的误差。
5.O11在光照和空气中易被氧化,注意避光密封保存。
6.对不同的细菌样本,应选择合适的孵育时间和浓度,以观察ROS的变化。应根据预实验情况调整染色浓度和时间。
1. 根据样本数量,用纯水将探针稀释液B进行10倍稀释。
2. 根据样本数量,用10倍稀释过的探针稀释液B将探针进行1000倍稀释。即配成染色工作液。
O11探针标记:
1. 准备1 ml新鲜待测菌液。
2. 将待测细菌样本离心收集菌体。
3. 用PBS洗涤菌体2-3次。离心收集菌体沉淀。
4. 用500 μl-1ml染色工作液重悬菌体。
5. 在37℃避光孵育30-45分钟。
6. 孵育结束后,离心收集菌体。
7. 用PBS清洗细胞一次。离心收集菌体。
8. 用500 μl PBS重悬菌体。充分混匀。
9. 取200 μl加入荧光检测用黑色96孔板。
10. 置于酶标仪中,后于激发波长为488 nm、发射波长526 nm检测荧光强度。
结果处理:
荧光强度强,细菌活性氧强度高。
1.活性氧结果如何分析?
ROS是多种物质的统称,不像某一单一活性氧指标,无法检测其绝对的含量,只能通过设置参照样本,以参照样本的倍数来反映目标样本相对含量变化,这个“相对”是针对参照的。分析结果是定性的,也是没有单位的,因为它本质上是一个比值(目标/参照)。反映的是模型样本通过具体的干预措施(如养分缺失、缺氧、药物治疗或遗传基因操控等)如何影响其ROS的变化,测定其ROS是增加或者降低了。
2.荧光强度在变化?
可以观察到荧光的逐渐增加(由于自动氧化)或减少(由于细胞中的染料损失或光漂白)。在没有任何刺激或诱导的情况下,健康的未经处理的细胞中的荧光突发可以指示细胞死亡或一些其他氧化事件的进展。
注意检测时平行操作即可。
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