产品概述
product description
保存温度
-20℃ 避光
注意事项
1.避免反复冻融。
2.可以根据需要分装后冻存。
3.探针为DMSO溶液,在2-8℃时是固体状态,冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
2.可以根据需要分装后冻存。
3.探针为DMSO溶液,在2-8℃时是固体状态,冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
有效期
6个月
检测方法
1.荧光酶标仪 2.荧光光度计
适用样本
纯化线粒体
产品特点
1.使用方便:可用荧光分光光度计、荧光酶标仪检测;
2.背景低,灵敏度高;
3.线性范围宽,使用方便。
2.背景低,灵敏度高;
3.线性范围宽,使用方便。
仪器准备
1.荧光酶标仪 2.荧光光度计,
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
PBS缓冲液或者HBSS
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.黑色96孔板
2.吸头
3.一次性手套
4.黑色96孔板
使用注意事项
1.O07染色液为DMSO溶液,冬季气温较低时在室温时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解,吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
2.使用前,先将本品取出回温至室温,并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
3.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
4.标记的条件因细胞种类而异,根据不同样本的实际染色结果做相应调整,在每次实验前,请先根据不同的实验要求、细胞类型、膜通透性等进行优化,确定最佳条件。以下方法仅供参考。
5.染色后立即进行分析。
6.荧光酶标仪检测必须使用荧光检测专用的黑色96孔板。
使用方法
染色工作液配制:
根据样本数量,用染料稀释液将BBcellProbe® O07荧光染料10倍稀释,再用PBS缓冲液或者其它等渗缓冲液20-40倍稀释,配制成染色工作液。
O07探针标记:
1. 准备新鲜待测线粒体。
【注】:
一般为大约总蛋白量为10~100 μg的纯化的线粒体。
2. 将线粒体样本用200 μl染色工作液重悬,充分混匀。
3. 在37℃避光孵育20-60分钟。
4. 孵育结束后,离心收集线粒体。
5. 用PBS清洗线粒体一次。离心收集线粒体。
6. 用200 μl PBS重悬线粒体。充分混匀。
7. 加入荧光检测用黑色96孔板。
8. 置于酶标仪中,后于激发波长为488 nm、发射波长526 nm检测荧光强度。
【注】:
此处以酶标仪检测为例。
根据实验室设备情况,没有酶标仪的话根据所使用的荧光光度计所需上样体积重悬线粒体检测。
结果处理:
荧光强度强表示线粒体活性氧强度高。
【注】:
荧光强度强则活性氧(ROS)含量高。
可以用实验中对照样本的荧光强度值为基准,待测组样本的荧光强度值占对照样本的百分比来比较活性氧(ROS)程度差异。
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