

贝博® BBoxiProbe® 组织超氧阴离子(•O2–)检测试剂盒是一种利用新型荧光探针BBoxiProbe® O78进行组织超氧阴离子(•O2–)检测的试剂盒。本试剂盒中的BBoxiProbe® O78探针为红色荧光的超氧阴离子探针,具有510 / 590 nm的最大激发/发射波长。
BBoxiProbe® O78探针在组织中超氧阴离子(•O2–)存在的条件下,被氧化生成红色荧光物质,红色荧光强度与组织内超氧阴离子水平成正比,检测产物的荧光强度就可以知道组织内超氧阴离子(•O2–)的水平。
在激发波长510 nm,发射波长590 nm附近,使用荧光分光光度计、荧光酶标仪等检测BBoxiProbe® O78氧化产物荧光强度,从而测定组织内超氧阴离子(•O2–)水平。
本试剂盒可以用于各种动物和植物样本的检测。
一般最好使用新鲜组织样本检测,反映的是组织当时的状态。冻存的组织样本的超氧阴离子在长期冻存过程中会损失掉,有条件的话就使用新鲜样本,不建议使用冻存的组织样本。已经冻存的组织样本中残余的超氧阴离子也可以用本试剂盒检测。
贝博® BBoxiProbe® 可以为您提供各种细胞样本、切片样本、组织样本的活性氧、活性氮检测试剂盒产品。
贝博® BBoxiProbe® 可以为您提供总活性氧、总活性氮和各种亚型的活性氧/活性氮的检测试剂盒产品。
贝博® BBoxiProbe® 可以为您提供各种绿色、红色、蓝色、深红色的活性氧/活性氮检测试剂盒产品。
贝博® BBcellProbe® 可以提供各种细胞分析试剂盒。包括细胞凋亡、活性、增殖、毒性、活性氧、周期、细胞代谢、氧化应激、膜流动性、膜电位、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、胞外酸化、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种细胞检测试剂盒产品。
贝博® BBcellProbe® 可以为您提供各种细胞成像、细胞示踪与追踪试剂盒产品。包括各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品,以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。
贝博® BBcellProbe® 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。
贝博® BBcellProbe® 可以提供各种细胞、组织染色,免疫组织化学,细胞培养等相关试剂盒产品。
2.染色液BBoxiProbe® O78为DMSO溶液,冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
2.荧光酶标仪
2.冻存组织
2.背景低,灵敏度高;
3.线性范围宽,使用方便。
2.荧光酶标仪
2.匀浆机/匀浆器
3.离心机
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
7.冰箱
2.BCA蛋白定量试剂
2.吸头
3.黑色96孔板
4.一次性手套
2.O78染色液为DMSO溶液,冬季气温较低时在室温时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解,吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
3.使用前,先将本品取出回温至室温,并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
4.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间,以减少各种可能的误差。
5.必须使用荧光检测专用的黑色96孔板。
根据样本数量,用纯水将O78探针10倍稀释。充分混匀,备用。
样本处理:
1. 刚取得的新鲜组织样本用PBS洗净。
2. 准确称取50 mg或100 mg组织样本,加入500 μl-1 ml匀浆缓冲液A,用匀浆机/匀浆器充分匀浆。
3. 在100×g,4℃离心5分钟,取上清备用。
样本检测:
1. 在96孔板中加入190微升匀浆上清液、10微升O78探针,用移液器吹打,使之充分混匀。
2. 在37℃避光孵育20-30分钟。
3. 置于酶标仪中,激发波长为510 nm、发射波长590 nm检测荧光强度。
蛋白定量:
1. 另取50微升上清匀浆液,用PBS大约稀释30倍。
2. 取100微升进行蛋白定量。
结果处理:
以荧光强度(RFU)/蛋白浓度(毫克蛋白)表示组织羟自由基强度。
【注】:
数据与蛋白浓度的单位无关。
此处以蛋白浓度数据作为校正系数,对不同样品进行均一化处理。
荧光强度强则超氧阴离子含量高。
可以用实验中对照样本的荧光强度值为基准,待测组样本的荧光强度值占对照样本的百分比来比较超氧阴离子程度差异。
通过设置参照样本,以参照样本的倍数来反映目标样本相对含量变化,这个“相对”是针对参照的。分析结果是定性的,也是没有单位的,因为它本质上是一个比值(目标/参照)。反映的是模型样本通过具体的干预措施(如养分缺失、缺氧、药物治疗或遗传基因操控等)如何影响其O2•-的变化,测定其O2•-是增加或者降低了。
2.背景荧光比较高?
在没有细胞外酯酶和其他氧化酶的情况下,荧光随时间的逐渐增加可能是来自自发水解,导致水解的原因可能与大气氧化或光诱导氧化有关。
3.荧光强度在变化?
可以观察到荧光的逐渐增加(由于自动氧化)或减少(由于细胞中的染料损失或光漂白)。在没有任何刺激或诱导的情况下,健康的未经处理的细胞中的荧光突发可以指示细胞死亡或一些其他氧化事件的进展。
注意检测时平行操作即可。
Zirconia Nanoparticles Induce HeLa Cell Death Through Mitochondrial Apoptosis and Autophagy Pathways Mediated by ROS
Frontiers in Chemistry 2021
2.Minfa Zhang et al.
GPR12 inhibits migration and promotes apoptosis in esophageal cancer and hypopharyngeal cancer cells
Thoracic Cancer 2021
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