组织一氧化氮检测试剂盒(NO)-绿色荧光

BB-46073
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  • 100T
  • 200T
价格
  • ¥1500元
  • ¥2600元
数量
产品概述 product description

贝博® BBoxiProbe® 组织一氧化氮检测试剂盒是一种利用新型荧光探针BBoxiProbe® O36进行组织一氧化氮检测的试剂盒。本试剂盒中的BBoxiProbe® O36 NO探针为绿色荧光的一氧化氮探针,具有488 / 526 nm的最大激发/发射波长。
贝博® BBoxiProbe® O36 NO探针在组织中一氧化氮存在的条件下,被氧化生成绿色荧光物质,绿色荧光强度与组织内一氧化氮水平成正比,检测O36产物的荧光强度就可以知道组织内一氧化氮的水平。
在激发波长488 nm,发射波长526 nm附近,使用荧光酶标仪、荧光分光光度计等设备检测O36产物荧光强度,从而测定组织内一氧化氮水平。
本试剂盒可以用于各种动物样本的总一氧化氮的快速定性检测。通过荧光强度的大小来快速确定具体的干预措施(如养分缺失、药物治疗或遗传基因操控等)如何影响一氧化氮变化,一氧化氮增加的样本荧光强度大。
BBoxiProbe® O系列一氧化氮探针具有多种颜色可以选择,可根据情况对样品进行多色标记实验。除了本试剂盒的绿色荧光探针,贝博还可以提供蓝色、红色、深红色荧光的一氧化氮检测试剂盒。
一般最好使用新鲜组织样本检测一氧化氮,反映的是组织当时的一氧化氮状态。冻存的组织样本的NO在长期冻存过程中会损失掉,有条件的话就使用新鲜样本,不建议使用冻存的组织样本。已经冻存的组织样本中残余的NO也可以用本试剂盒检测。
以每个组织样本50-100 mg计,本试剂盒小包装可以检测100个样本。

贝博® BBoxiProbe® 可以为您提供各种细胞样本、切片样本、组织样本的活性氧、活性氮检测试剂盒产品。
贝博® BBoxiProbe® 可以为您提供总活性氧、总活性氮和各种亚型的活性氧/活性氮的检测试剂盒产品。
贝博® BBoxiProbe® 可以为您提供各种绿色、红色、蓝色、深红色的活性氧/活性氮检测试剂盒产品。
贝博® BBcellProbe® 可以提供各种细胞分析试剂盒。包括细胞凋亡、活性、增殖、毒性、活性氧、周期、细胞代谢、氧化应激、膜流动性、膜电位、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、胞外酸化、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种细胞检测试剂盒产品。

保存温度
2-8℃ 避光
注意事项
1.探针长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。
2.探针为DMSO溶液,冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
4.试剂拆封后请尽快使用完!
有效期
一年。
检测方法
1.荧光分光光度计
2.荧光酶标仪
适用样本
1.新鲜组织
2.冻存组织
产品特点
1.使用方便:可用荧光分光光度计、荧光酶标仪检测;
2.背景低,灵敏度高;
3.线性范围宽,使用方便。
产品应用
1.荧光分光光度计
2.荧光酶标仪
仪器准备
1.荧光分光光度计或荧光酶标仪
2.匀浆机/匀浆器
3.离心机
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
7.冰箱
试剂准备
1.PBS 缓冲液或者HBSS
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.黑色96孔板
4.一次性手套
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。
2.BBoxiProbe® O36探针染色液为DMSO溶液,冬季气温较低时在室温时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解,吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
3.使用前,先将本品取出回温至室温,并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
4.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间,以减少各种可能的误差。
5.必须使用荧光检测专用的黑色96孔板。
使用方法
试剂准备:
根据样本数量,用纯水将O36探针10倍稀释。充分混匀,备用。

样本处理:
1. 刚取得的新鲜组织样本用PBS洗净。
2. 准确称取50 mg或100 mg组织样本,加入500 μl - 1 ml检测缓冲液A,用匀浆机/匀浆器充分匀浆。

样本检测:
1. 在96孔板中加入190微升匀浆上清液、10微升O36探针,用移液器吹打,使之充分混匀。
2. 在37℃避光孵育20-30分钟。
3. 置于酶标仪中,后于激发波长为488 nm、发射波长526 nm检测荧光强度。
蛋白定量:
1. 另取50微升上清匀浆液,用PBS大约稀释20-30倍。
2. 取100微升进行蛋白定量,测定蛋白浓度(mg/ml)。

结果处理:
以荧光强度(RFU)/蛋白浓度(毫克蛋白)表示组织一氧化氮强度。
【注】:
 数据与蛋白浓度的单位无关。
 此处以蛋白浓度数据作为校正系数,对不同样品进行均一化。
 荧光强度强则一氧化氮(NO)含量高。
 可以用实验中对照样本的荧光强度值为基准,待测组样本的荧光强度值占对照样本的百分比来比较一氧化氮(NO)程度差异。
常见问题分析
1.一氧化氮结果如何分析?
通过设置参照样本,以参照样本的倍数来反映目标样本相对含量变化,这个“相对”是针对参照的。分析结果是定性的,也是没有单位的,因为它本质上是一个比值(目标/参照)。反映的是模型样本通过具体的干预措施(如养分缺失、缺氧、药物治疗或遗传基因操控等)如何影响其NO的变化,测定其NO是增加或者降低了。

2.背景荧光比较高?
在没有细胞外酯酶和其他氧化酶的情况下,荧光随时间的逐渐增加可能是来自自发水解,导致水解的原因可能与大气氧化或光诱导氧化有关。

3.荧光强度在变化?
可以观察到荧光的逐渐增加(由于自动氧化)或减少(由于细胞中的染料损失或光漂白)。在没有任何刺激或诱导的情况下,健康的未经处理的样本中的荧光突发可以指示细胞死亡或一些其他氧化事件的进展。
注意检测时平行操作即可。
参考文献
1.Xiaohui Chen et al.
Nitric oxide-induced stromal depletion for improved nanoparticle penetration in pancreatic cancer treatment
Biomaterials 2020 (IF=10.317)