活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括过氧化氢(H2O2,Hydrogen peroxide)、羟基自由基(•OH,Hydroxyl radical)、单线态氧(1O2,Singlet oxygen)、一氧化氮(NO,Nitric oxide)、超氧阴离子(•O2-,Superoxide anion)、过氧化自由基(ROO• ,Peroxyl radical)、过氧羟自由基(HOO• ,hydroperoxyl)及其下游产物过氧化物过氧亚硝基阴离子(ONOO-,Peroxynitrite anion)、ClO-和羟化物等,参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。 活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生主要是氧化磷酸化的结果,在呼吸链中,在某些位点会有“泄露”的电子直接和氧气或和其他电子受体反应,在酶或非酶作用下引发一系列反应生成不同种类的活性氧:“泄露”的电子最初和氧气反应生成超氧阴离子自由基(O2•-)(图1A)。超氧阴离子遇水生成H2O2(图1B),同时过氧化氢也可由氧气在单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)的作用下生成(图1C),生成的过氧化氢在髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)的催化下与Cl-反应可生成ClO-(图1D),在铁或铜离子的催化下发生Fenton反应生成OH•(图1E),超氧阴离子遇氮氧化物反应生成ONOO-(图1F)。这些生成的高氧化活性的物质统称为活性氧。 贝博® BBoxiProbe® 羟基自由基(•OH)检测试剂盒是一种利用羟基自由基(•OH)特异性深红色荧光探针BBoxiProbe® O28进行羟基自由基检测的试剂盒。BBoxiProbe® O28可自由透过活细胞膜进入细胞内,并被细胞内的羟基自由基(•OH)氧化,产生红色荧光产物。根据活细胞中红色荧光的产生,可以判断细胞羟基自由基(•OH)含量的多少和变化。用流式细胞仪或荧光显微镜可直接观察,是一种快速简便的组织或培养活细胞中羟基自由基(•OH)检测方法。 在激发波长516 nm,发射波长606 nm附近,使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测荧光,从而测定细胞内羟基自由基(•OH)水平。 除了本红色荧光检测试剂盒外,贝博还可以提供绿色荧光的羟基自由基(•OH)检测试剂(相关产品:BB-470562/470563/470564)。 贝博® BBoxiProbe® 可以提供各种颜色的总活性氧检测产品,以及不同颜色的各种类型活性氧、活性氮的特异性检测产品。 贝博® BBcellProbe® 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以为您提供各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品,以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。
2.可以根据需要分装后冻存。
3.探针为DMSO溶液,在2-8℃时是固体状态,冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
2.贴壁细胞
2.背景低,灵敏度高;
3.线性范围宽,使用方便。
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
2.吸头
3.一次性手套
4.黑色96孔板
3.探针标记完毕并洗净残余探针后,可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描,以确认探针的标记情况是否正常。
4.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间,以减少各种可能的误差。
5.原位检测必须使用荧光检测专用的黑色透明底96孔细胞培养板。
6.以下操作步骤仅供参考,请根据实际样本情况调整或参考文献。 7.BBoxiProbe® O28探针在光照和空气中易被氧化,注意避光密封保存。
1. BBoxiProbe® O28溶液可在新鲜无血清培养基、HBSS缓冲液、PBS缓冲盐溶液稀释到所需浓度,1000倍稀释,以此染色工作液更换细胞培养基;也可直接向细胞孵育液体中加入BBoxiProbe® O28探针溶液至所需浓度。
2. 依据细胞羟自由基含量的不同,孵育时间可选择15-60 分钟,在37℃或室温进行避光孵育。
3. 孵育结束后,用新鲜溶液清洗细胞。
4. 用相关仪器进行荧光检测。
对于原位标记探针的样品可以用荧光酶标仪检测或激光共聚焦显微镜直接观察,或收集细胞后用荧光分光光度计或流式细胞仪检测。
对于收集细胞后标记探针的样品可以用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测,用激光共聚焦显微镜直接观察也可以。
使用516 nm激发波长,606 nm发射波长,实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱变化。
荧光显微镜检测:
1. 对贴壁生长细胞或活组织,可直接在荧光显微镜下染色观察;
2. 对悬浮生长细胞,染色后取25-50 μl细胞悬液滴到一张显微载玻片上,再盖上一张盖玻片。
3. 荧光显微镜检测。
流式细胞仪分析:
1. 对贴壁生长细胞,用胰酶消化制备成单细胞悬液;对悬浮生长细胞,直接收集细胞。用0.5~1 ml冰冷PBS重悬细胞(5~10万)。
2. 采用516 nm波长激发,测定606 nm的发射,羟自由基强度高的细胞有较强的红色荧光。
Tumor cell-activated “Sustainable ROS Generator” with homogeneous intratumoral distribution property for improved anti-tumor therapy
Theranostics 2021 (IF= 8.579)
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