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产品概述
product description
细胞骨架(cytoskeleton）是真核细胞中由蛋白质聚合而成的三维的纤维状网架体系。细胞骨架包括微丝、微管和中间纤维。细胞骨架在维持细胞形态，承受外力、保持细胞内部结构的有序性方面起重要作用。 显示细胞骨架的常用方法有两种：骨架蛋白染色法和免疫荧光染色法。骨架蛋白染色法具有简单易行的特点，但不能区分骨架蛋白的组成，有些类型的纤维太细,在光学显微镜下无法分辨，常用于骨架形态及完整性研究；免疫荧光染色法可特异显示骨架蛋白，是用一种微丝解聚抑制剂,它与肌动蛋白纤丝有强亲和作用,使肌动蛋白纤丝稳定,抑制解聚,且只与F-actin结合.因此,利用荧光标记可以清晰显示细胞中微丝的形态,利用荧光显微镜对荧光标记的细胞骨架进行观察,可以得到清晰的实验结果.具有更普遍的应用意义。 本试剂盒采用骨架蛋白染色法染色细胞骨架，可以用于各种植物、动物的细胞骨架染色。需要荧光染色试剂盒，可以选择贝博货号44402的产品。
保存温度
2-8℃避光
注意事项
1.有效期为试剂盒未拆封前按要求条件保存的有效期。
2.试剂拆封后请尽快使用完！
2.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
显微镜
适用样本
细胞
仪器准备
1. 显微镜
2. 移液器
3. 冰箱
4. 冰盒
2. 移液器
3. 冰箱
4. 冰盒
试剂准备
1. PBS缓冲液
2. 4%多聚甲醛或3%戊二醛3. 纯水
2. 4%多聚甲醛或3%戊二醛3. 纯水
耗材准备
1. 玻片
2. 滴管
3. 一次性手套
2. 滴管
3. 一次性手套
使用注意事项
1. 标本应新鲜，且未受其他化学物品污染。
2. 应根据组织、细胞类型不同调整通透时间。
3. 动物细胞样本细胞通透剂处理的时间很关键，如果处理时间太短，会造成很深的背景颜色，干扰细胞骨架的观察；如果处理时间太长，会破坏骨架蛋白使骨架纤维断裂，造成细胞空洞。通透时间应控制在10-35分钟。需要根据预实验的染色结果确定最佳通透时间。一般预实验起始通透时间植物样本为20分钟，动物细胞样本15分钟。
4. 染色液染色时间根据根据预实验结果可以进行调整，颜色过浅可延长染色时间，颜色过深可缩短染色时间。
5. 洗片时动作要轻柔，避免将细胞从玻片上洗掉。
6. 染色后用水充分洗涤，自然晾干即可，不能用常规的酒精梯度脱水方法。
2. 应根据组织、细胞类型不同调整通透时间。
3. 动物细胞样本细胞通透剂处理的时间很关键，如果处理时间太短，会造成很深的背景颜色，干扰细胞骨架的观察；如果处理时间太长，会破坏骨架蛋白使骨架纤维断裂，造成细胞空洞。通透时间应控制在10-35分钟。需要根据预实验的染色结果确定最佳通透时间。一般预实验起始通透时间植物样本为20分钟，动物细胞样本15分钟。
4. 染色液染色时间根据根据预实验结果可以进行调整，颜色过浅可延长染色时间，颜色过深可缩短染色时间。
5. 洗片时动作要轻柔，避免将细胞从玻片上洗掉。
6. 染色后用水充分洗涤，自然晾干即可，不能用常规的酒精梯度脱水方法。
使用方法
不同样本的操作方法稍有差异，请根据具体样本操作。下面以细胞爬片/涂片样本的染色为例，滴加相应的试剂到玻片上，加样量以覆盖样本即可。如果是植物切片等，也可以在离心管、试管等里面进行洗涤、通透、染色等操作，最后置载玻片上观察即可。
1. 细胞洗涤液配制：根据样本数量，将细胞洗涤液用纯水10倍稀释备用。
2. 将制作好的细胞爬片/细胞涂片用1X细胞洗涤液洗涤一次。
3. 细胞固定：滴加2%多聚甲醛固定细胞3秒钟，立即用细胞洗涤液洗涤3次。
注：操作时滴加2%多聚甲醛固定3秒左右即可，不要超过5秒钟。吸掉多聚甲醛然后用洗涤液洗涤。样本多时可以用容器装好洗涤液分别浸泡洗涤3次，样本较少时也可以加500ul洗涤液到玻片上进行洗涤。
此步骤为动物细胞样本的步骤，植物切片类不需要做此步骤，第2步洗涤完直接进行第4步通透即可。
4. 透化：滴加通透剂覆盖样本，处理10-30分钟。
5. 用细胞洗涤液洗细胞3次，自然晾干。
6. 固定：用4%多聚甲醛或3%戊二醛固定5-20分钟。
7. 用PBS洗细胞3次，自然晾干。
8. 染色：用细胞骨架染色液染色15分钟-1小时。
9. 用纯水洗细胞2次，自然晾干。
10. 用光学显微镜观察。或二甲苯透明、封片后观察。
结果：
细胞骨架纤维呈蓝色。细胞核和细胞质表面分布许多排列不规则的纤维束，走向清晰，呈浅蓝色或深蓝色。
如果见到部分细胞骨架纤维并非呈纤维状，而是呈串珠状或颗粒状，可以进一步优化通透时间。
1. 细胞洗涤液配制：根据样本数量，将细胞洗涤液用纯水10倍稀释备用。
2. 将制作好的细胞爬片/细胞涂片用1X细胞洗涤液洗涤一次。
3. 细胞固定：滴加2%多聚甲醛固定细胞3秒钟，立即用细胞洗涤液洗涤3次。
注：操作时滴加2%多聚甲醛固定3秒左右即可，不要超过5秒钟。吸掉多聚甲醛然后用洗涤液洗涤。样本多时可以用容器装好洗涤液分别浸泡洗涤3次，样本较少时也可以加500ul洗涤液到玻片上进行洗涤。
此步骤为动物细胞样本的步骤，植物切片类不需要做此步骤，第2步洗涤完直接进行第4步通透即可。
4. 透化：滴加通透剂覆盖样本，处理10-30分钟。
5. 用细胞洗涤液洗细胞3次，自然晾干。
6. 固定：用4%多聚甲醛或3%戊二醛固定5-20分钟。
7. 用PBS洗细胞3次，自然晾干。
8. 染色：用细胞骨架染色液染色15分钟-1小时。
9. 用纯水洗细胞2次，自然晾干。
10. 用光学显微镜观察。或二甲苯透明、封片后观察。
结果：
细胞骨架纤维呈蓝色。细胞核和细胞质表面分布许多排列不规则的纤维束，走向清晰，呈浅蓝色或深蓝色。
如果见到部分细胞骨架纤维并非呈纤维状，而是呈串珠状或颗粒状，可以进一步优化通透时间。
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