脂质(Lipid)是中性脂肪、类脂及其衍生物的总称,其共同的物理特性是不溶于水,易溶于有机溶剂。人体的脂肪主要有两种: 1、储存脂肪,如中性脂肪,主要分布于皮下、肾、胰腺等部位。 2、结构脂肪,如类脂(磷脂、糖脂、胆固醇等),主要分布于细胞内。中性脂肪(Neutral fat)是由三分子脂肪酸和一分子甘油组成的脂类,呈中性。中性脂肪是储存能量的方式之一,在氧化时释放出能量。 在正常情况下,除脂肪细胞外,其他细胞在光学显微镜下几乎看不到脂滴,如果细胞质内出现大量脂滴即为脂肪变性,常见于肝细胞、心肌细胞、肾曲管上皮细胞等。中性脂肪染色经常采用苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ、苏丹黑B、油红O法等。传统方法采用苏丹染料,最近发现偶氮染料油红O更适合脂肪的染色。油红O是很强的脂溶剂和染脂剂,较易与甘油三脂结合呈小脂滴状,与磷脂结合力稍差。 贝博苏丹黑B染色液主要用于显示组织器官的脂肪变性和类脂质的异常沉着,常发生于肝、肾、心等实质脏器的脂肪变性,细胞内出现多数中性脂肪滴;鉴别和诊断脂肪组织中所发生的肿瘤及其性质。 标本不采用含有乙醇的固定液(如需要固定可采用10%福尔马林)、也不采用石蜡切片,需用冰冻切片或碳蜡切片。脂肪瘤、脂肪肉瘤、卵泡膜瘤、肾上腺皮质腺瘤等行苏丹黑B染色后,呈阳性反应;肾透明细胞癌、卵巢纤维瘤等行苏丹黑B染色后,呈阴性反应。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。
2.试剂拆封后请尽快使用完!
2. 70%乙醇
3. 甘油明胶
2. 一次性手套
2. 标本不宜采用含有乙醇的固定液、也不宜用石蜡切片,需用冰冻切片。
3. 在染色过程中必须防止染料发生沉淀。故切片入染液时应密封,勿与流动空气相接触,避免溶液挥发时发生沉淀。
4. 苏丹染料容易褪色,应密闭保存。
5. 甘油明胶封固的样本,保存时间不长。如需长期保存,可以在盖玻片与载玻片交界的边缘用中性树胶封闭。
1、 新鲜组织低温切片,一般-20℃~-25℃。如样本为脂肪瘤,应调节至-30℃。
2、 冰冻切片5~10μm(6~8μm为佳),贴于载玻片上。
3、 70%乙醇稍微浸洗一下。
4、 入试剂A苏丹黑B染色液,浸染1~2min。
5、 70%乙醇洗去多余染液。
6、 蒸馏水浸洗1min。
7、 入试剂B核快速染色液,淡染细胞核5~10min。
8、 (可选)镜下观察如染色过深,可用酸性分化液分化数秒。
9、 自来水稍洗后,蒸馏水稍洗一下。
10、 用滤纸吸去切片及周围的水分,让其稍微干燥。
11、 甘油明胶或阿拉伯糖胶封固。
(二)植物样本:
1、 新鲜组织低温植物切片,贴于载玻片上。
2、 滴加几滴苏丹黑B染色液,染色3~5min。
3、 用50%乙醇洗去多余染液。
4、 自来水稍洗后。
5、 用滤纸吸去切片及周围的水分,镜检拍照,其脂肪呈黑色。
染色结果:
中性脂肪 黑色
磷脂 灰黑色
细胞核 红色
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