乙酰胆碱酯酶染色试剂盒(亚铁氰化铜法)

BB-44308
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  • 2×20ml
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  • ¥1500元
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产品概述 product description

胆碱酯酶(cholinesterase，ChE)属于特异性酯酶，可分为两大类。一类是乙酰胆碱酯酶(Acetyl cholinesterase，AChE)又称为真性胆碱酯酶，能水解乙酰胆碱，起到生理的调节作用；另一类为胆碱酯酶，又称假性胆碱酯酶(Pseudo cholinesterase，PsChE)，能水解胆碱的酯而不能水解乙酰胆碱酯。乙酰胆碱酯酶主要存在于神经元的胞质内、神经与肌肉接头处即所谓运动终板处；PsChE主要存在于血浆、胰腺、唾液腺内，生理功能尚不明确。 贝博®乙酰胆碱酯酶染色液(亚铁氰化铜法)属于Karnovsky和Roots法，其染色原理是乙酰胆碱酯酶水解碘化乙酰硫代胆碱，释放乙酸和硫代胆碱。硫代胆碱中的硫氢基(-SH)把铁氰化钾还原为亚铁氰化钾，后者与铜离子结合形成不溶性的红棕色至深棕色的亚铁氰化铜沉淀在酶活性部位而显示出来。 其优点是操作简便、酯酶的扩散较少，其缺点是对底物对组织的渗透性较差。该染色液可用于观察中枢神经和周围神经纤维等疾病情况下的改变，亦有利于巨结肠症、肠神经元发育异常的诊断。有机农药中毒时可使该酶受到抑制，酶的活性下降而呈阴性反应。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。

保存温度
2-8℃避光
注意事项
1.有效期为试剂盒未拆封前按要求条件保存的有效期。
2.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
6个月
检测方法
显微镜
适用样本
冰冻切片
仪器准备
1. 恒温培养箱
2. 光学显微镜
试剂准备
1. 纯水
2. 10%甲醛钙固定液
耗材准备
1.吸头
2.一次性手套
使用注意事项
1. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2. 本染色液适用于冰冻切片，同时应减少切片在室温暴露的时间。
使用方法
试剂的配制：
AChE孵育工作液的配制：
使用前，取A2加入A1中，使后者完全溶解，即为A12混合液，2-8℃保存。
取适量的A12混合液、A3、A4、A5、A6，按A12混合液：A3：A4：A5：A6=1:7:1:1:0.2充分混合，即为AChE孵育工作液，6h内使用；
【注】：
 如果想显示AChE和ChE，即无需区分AChE和ChE，无需加入A6: Iso-OMPA；

操作步骤（仅供参考）
1. 冰冻切片，厚6um，不固定或置于提前预冷的10%甲醛钙固定10min；
2. 纯水洗3次，每次1min；
3. 切入预温的AChE孵育工作液中，37℃避光孵育1~3h（一般不超过6h），至切片呈淡棕色取出；
4. 纯水水洗，镜下观察如活性部分仍较淡，可于纯水洗后再进行孵育，至反应合适为止；
5. 流水冲洗5min；
6. 滴加苏木素染色液浅染细胞核3~5min；
7. 流水冲洗10min；
8. 常规脱水、透明、中性树胶封固。

染色结果：
AChE酶活性部位：红棕至深棕色
细胞核： 蓝色

阴性对照(可选)：
取配制好的AChE孵育工作液，按AChE孵育工作液: AChE-ChE抑制剂=50:1充分混合。
取相同切片入含AChE-ChE抑制剂的AChE孵育工作液中，其余同上，呈阴性反应。

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