室温避光

1.有效期为试剂盒未拆封前按要求条件保存的有效期。
2.试剂拆封后请尽快使用完！

一年

显微镜

1. 石蜡切片
2. 冰冻切片
3. 细胞

1.显微镜
2.移液器
3.吸头

1. 4%多聚甲醛、70%乙醇和95%乙醇。如需脱水、透明和封片处理，还需自备二甲苯，中性树胶或其它封片剂。
2. 如样品是石蜡切片，需自备90%乙醇，无水乙醇以及二甲苯。

1.离心管
2.吸头
3.一次性手套

1. 第一次使用本试剂时建议先取1-2个样品做预实验。
2. 染色时间根据不同样本的实际染色结果做相应调整。
3. 切片脱蜡应尽量干净。系列乙醇应经常更换新液。
4. 盐酸乙醇分化时间应根据切片厚薄、组织类别以及新旧而定，另外分化后自来水冲洗时间应该足够，以便彻底清洗酸。
5. 乙醚-乙醇混合固定液是由乙醚和95%乙醇等量混合而得，再加入适量乙酸，密闭保存。蓝化液常使用0.2～1%氨水或Scott促蓝液或0.1～1%碳酸锂溶液。
6. 冷冻切片染色时间尽量要短。

1. 样品处理
石蜡切片：
二甲苯中脱蜡10-15分钟。
换用新鲜的二甲苯，再脱蜡10-15分钟。
无水乙醇5分钟。
90%乙醇2分钟。
70%乙醇2分钟。
30%乙醇2分钟。
蒸馏水2分钟。

冰冻切片：
回温后的切片蒸馏水30秒-2分钟。
乙醚-乙醇混合固定液固定。
自来水冲洗 。

培养细胞：
用4%多聚甲醛固定10分钟以上。
蒸馏水洗涤2分钟。
换用新鲜的蒸馏水，再洗涤2分钟。

2. 2.1苏木素染色
上述处理好的样品：
苏木素染色液染色5-10分钟(可以根据染色结果和要求调整时间)。
自来水中流水冲洗去多余的染色液，约30-60秒。
蒸馏水再洗涤一遍(数秒钟)。
(可选步骤，可不做) 盐酸乙醇分化。自来水冲洗。蓝化液返蓝。自来水冲洗
（可接着直接入伊红染液染色。）
即可直接观察， 显微镜下观察，细胞核呈蓝紫色。
如果用于免疫组化等染色后的复染，可以参考上述步骤在其它染色完成后直接进行苏木素染色。

2.2伊红染色
上述处理好的样品：
用蒸馏水浸润组织1-2分钟，确保蒸馏水覆盖整个组织，使水分均匀分布。
伊红染色液染色30秒-2分钟(可以根据染色结果和要求调整时间)。
70%乙醇洗涤2次后即可直接观察或者继续按后续步骤进行脱水、透明、封片。
脱水，透明，封片后镜检。
如果用于免疫组化等染色后的复染，可以参考上述步骤在其它染色完成后直接进行伊红染色。显微镜下观察，细胞浆呈红色。

染色结果：细胞核呈蓝色；细胞质、肌纤维、胶原纤维、甲状腺胶质等呈深浅不一的红色；角蛋白、红细胞等呈明亮的橙红色。

3. 脱水、透明、封片或进行其它染色
脱水、透明、封片：
95%乙醇脱水2分钟。
换用新鲜的95%乙醇再脱水2分钟。
二甲苯透明5分钟。
换用新鲜的二甲苯，再透明5分钟。
用中性树胶或其它封片剂封片。

其它染色：
如果进行免疫荧光染色，或进行Hoechst等荧光染料的染色，在苏木素或伊红染色液染色后：
70％乙醇洗涤2次，每次2分钟。
PBS或生理盐水或TBS或TBST等用于免疫染色或荧光染料染色的溶液浸泡5分钟。
然后就可以进行免疫荧光染色或其它荧光染料的染色了。