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产品概述
product description
贝博® BBcellProbe® PI染色试剂用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色，染色后可用荧光显微镜检测或流式细胞仪检测。 PI染色液可用于细胞凋亡、周期的检测。Propidium Iodide是一种DNA结合性染料，其激发和发射波长分别为488nm和630nm，产生红色荧光，但无膜通透性，不能透过活细胞膜，只能染死细胞。 因此，在荧光显微镜下观察，正常细胞不能着色，早期凋亡细胞呈微弱红光，晚期凋亡细胞红光加强，坏死细胞呈强红色荧光。也可采用流式细胞仪利用细胞形态上的改变影响它们的光散射特性改变进行分析，还可与RNase A结合进行细胞周期分析。 贝博® BBcellProbe® 可以提供各种细胞检测试剂盒。包括细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以为您提供各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。
保存温度
-20℃ 避光
注意事项
1.长期不用可以-20℃保存。
2.避免反复冻融。
3.染色液需要长期保存时可以根据使用情况进行小量分装后-20℃保存。
4.试剂拆封后请尽快使用完！
2.避免反复冻融。
3.染色液需要长期保存时可以根据使用情况进行小量分装后-20℃保存。
4.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
荧光显微镜/激光共聚焦
适用样本
动物细胞
产品应用
荧光显微镜/激光共聚焦
仪器准备
1.荧光显微镜/激光共聚焦
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液 2.HBSS
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
2.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
3.染色后立即进行分析。
4.染色时间根据不同样本的实际染色结果做相应调整。
5.本染色液可用于培养细胞、细胞涂片、石蜡切片、冰冻切片的检测。石蜡切片用常规方法脱蜡、分化、冰冻切片用冰丙酮固定后检测。
6.根据样本情况和下游的检测仪器选择合适的染色方法，只要在染色时染色工作液能充分覆盖细胞样本即可。
7.染色时间根据不同样本的实际染色结果做相应调整。
8.PI有毒，操作时要戴上手套。
9.流式检测细胞凋亡时，其DNA可染性降低被认为是凋亡细胞的标志之一，但这种DNA可染性降低也可能是因为DNA含量的降低，或者是因为DNA结构的改变使其与染料结合的能力发生改变所致。在分析结果时应该注意。
10.以下以培养细胞的涂片的荧光显微镜检测为例，细胞染色不需要固定，也可以固定后染色，其他方法请参阅相关资料。
2.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
3.染色后立即进行分析。
4.染色时间根据不同样本的实际染色结果做相应调整。
5.本染色液可用于培养细胞、细胞涂片、石蜡切片、冰冻切片的检测。石蜡切片用常规方法脱蜡、分化、冰冻切片用冰丙酮固定后检测。
6.根据样本情况和下游的检测仪器选择合适的染色方法，只要在染色时染色工作液能充分覆盖细胞样本即可。
7.染色时间根据不同样本的实际染色结果做相应调整。
8.PI有毒，操作时要戴上手套。
9.流式检测细胞凋亡时，其DNA可染性降低被认为是凋亡细胞的标志之一，但这种DNA可染性降低也可能是因为DNA含量的降低，或者是因为DNA结构的改变使其与染料结合的能力发生改变所致。在分析结果时应该注意。
10.以下以培养细胞的涂片的荧光显微镜检测为例，细胞染色不需要固定，也可以固定后染色，其他方法请参阅相关资料。
使用方法
1. 染色工作液的配制：
根据样品数用PBS将PI染色液50-200倍稀释，配制成染色工作液。
2. 细胞涂片的制备：
贴壁细胞，可将盖玻片放于培养器皿中，让培养细胞长于玻片上，然后用药物诱导细胞凋亡后取出，用4%多聚甲醛固定5min。也可其他方式培养后收集细胞制作涂片检测。
对于悬浮细胞，用药物诱导细胞凋亡后，500-1000g离心5分钟收集细胞，用PBS洗2次，收集调整细胞数为1X105/ml，涂片或用离心涂片，用4%多聚甲醛固定5min；
3. 用PBS洗涤涂片两次。
4. 加适量染色工作液于涂片上，室温避光染色5-20分钟。
5. 用荧光显微镜检测结果。染料-DNA复合物的最大激发波长为488nm，最大发射波长为630nm。
结果分析 ：
置于荧光显微镜下用488nm激发光观察结果：正常细胞不能着色，早期凋亡细胞呈微弱红光，晚期凋亡细胞红光加强，坏死细胞呈强红色荧光。
流式检测用氩离子激发荧光，激光光波波长为488nm，发射光波波长大于630nm，产生红色荧光分析PI荧光强度的直方图也可分析前散射光对侧散射光的散点图。在前散射光对侧散射光的散点图或地形图上，凋亡细胞与正常细胞相比，前散射光降低，而侧散射光可高可低，与细胞的类型有关；在分析PI荧光的直方图时，先用门技术排除成双或聚集的细胞以及发微弱荧光的细胞碎片，在PI荧光的直方图上，凋亡细胞在G1/G0期前出现一亚二倍体峰。如以G1/G0期所在位置的荧光强度为1.0，则一个典型的凋亡细胞样本其亚二倍体峰的荧光强度为0.45，可用鸡和鲑鱼的红细胞的PI荧光强度做参照标准，两者分别为0.35和0.7，可以确保在两者之间的不是细胞碎片而是完整的细胞。
根据样品数用PBS将PI染色液50-200倍稀释，配制成染色工作液。
2. 细胞涂片的制备：
贴壁细胞，可将盖玻片放于培养器皿中，让培养细胞长于玻片上，然后用药物诱导细胞凋亡后取出，用4%多聚甲醛固定5min。也可其他方式培养后收集细胞制作涂片检测。
对于悬浮细胞，用药物诱导细胞凋亡后，500-1000g离心5分钟收集细胞，用PBS洗2次，收集调整细胞数为1X105/ml，涂片或用离心涂片，用4%多聚甲醛固定5min；
3. 用PBS洗涤涂片两次。
4. 加适量染色工作液于涂片上，室温避光染色5-20分钟。
5. 用荧光显微镜检测结果。染料-DNA复合物的最大激发波长为488nm，最大发射波长为630nm。
结果分析 ：
置于荧光显微镜下用488nm激发光观察结果：正常细胞不能着色，早期凋亡细胞呈微弱红光，晚期凋亡细胞红光加强，坏死细胞呈强红色荧光。
流式检测用氩离子激发荧光，激光光波波长为488nm，发射光波波长大于630nm，产生红色荧光分析PI荧光强度的直方图也可分析前散射光对侧散射光的散点图。在前散射光对侧散射光的散点图或地形图上，凋亡细胞与正常细胞相比，前散射光降低，而侧散射光可高可低，与细胞的类型有关；在分析PI荧光的直方图时，先用门技术排除成双或聚集的细胞以及发微弱荧光的细胞碎片，在PI荧光的直方图上，凋亡细胞在G1/G0期前出现一亚二倍体峰。如以G1/G0期所在位置的荧光强度为1.0，则一个典型的凋亡细胞样本其亚二倍体峰的荧光强度为0.45，可用鸡和鲑鱼的红细胞的PI荧光强度做参照标准，两者分别为0.35和0.7，可以确保在两者之间的不是细胞碎片而是完整的细胞。
参考文献
1.Yan Lu,TengFei Zhang,Yue Shi et al.
PFR peptide, one of the antimicrobial peptides identified from the derivatives of lactoferrin, induces necrosis in leukemia cells
Sci Rep. 2016 （IF=5.228）
2.Wei Feng, Liang Chen, Ming Qin et al.
Flower-like PEGylated MoS2 nanoflakes for near-infrared photothermal cancer therapy
Sci Rep. 2015 （IF=5.228）
3.Jie Gao, Fengying Gu, Hui Ruan et al.
Induction of apoptosis of gastric cancer cells SGC7901 in vitro by a cell-free fraction of Tibetan kefir
International Dairy Journal 2013 （IF=2.401）
PFR peptide, one of the antimicrobial peptides identified from the derivatives of lactoferrin, induces necrosis in leukemia cells
Sci Rep. 2016 （IF=5.228）
2.Wei Feng, Liang Chen, Ming Qin et al.
Flower-like PEGylated MoS2 nanoflakes for near-infrared photothermal cancer therapy
Sci Rep. 2015 （IF=5.228）
3.Jie Gao, Fengying Gu, Hui Ruan et al.
Induction of apoptosis of gastric cancer cells SGC7901 in vitro by a cell-free fraction of Tibetan kefir
International Dairy Journal 2013 （IF=2.401）
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